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目的:根据前期研究缺氧-复氧处理正常培养的人脐静脉内皮细胞一定时间,模拟临床心脏手术过程中肺缺血再灌注时肺内皮细胞的病理生理变化,RNAi转染抑制前B细胞克隆增强因子(PBEF)基因表达,检测PBEF表达变化,研究PBEF表达水平对TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子和细胞收缩力、细胞-细胞间粘附、细胞-基质间粘附的作用,研究PBEF在缺氧-复氧损伤的内皮细胞通透性变化过程中与P38MAPK/ERK信号途径的激活是否密切相关。方法:1、根据前期研究建立HUVECs缺氧(20h)/复氧(9h)模型、合成PBEFsiRNA序列。2、根据对培养的HUVECs随机采用缺氧-复氧和RNAi干预措施,分为缺氧复氧PBEFsiRNA转染组、缺氧复氧siRNA阴性控制组、缺氧复氧组、正常培养组。3、Western blot检测各组中内皮细胞PBEF表达水平、ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6的表达含量。4、Western blot检测各组中内皮细胞肌球蛋白轻链(MLC)及其磷酸化表达水平。5、Western blot检测各组HUVECs中钙粘蛋白(VE-cadherin)、粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)及其磷酸化表达水平和桩蛋白(paxillin)、连环蛋白(β-Catenin)表达水平。6、Western blot检测各组HUVECs中P38、ERK及其磷酸化表达水平。结果:1、PBEF在缺氧-复氧诱导损伤的HUVECs中表达明显增加,PBEF可促进TNF-α、IL-1β、IL-6炎症介质的表达释放(P<0.01)。2、PBEF可通过促进MLC、VE-cadherin、FAK磷酸化和β-Catenin、paxillin蛋白的表达,改变细胞收缩力,细胞-细胞附着力、细胞-基质附着力,改变内皮细胞结构(P<0.01)。3、PBEF可通过P38MAPK和ERK信号途径参与HUVECs通透性的改变(P<0.01)。结论:1、PBEF可增加缺氧/复氧后内皮细胞TNF-α、IL-1β、IL-6炎症介质的表达释放,加重肺损伤的炎症发应。2、PBEF可通过P38MAPK/ERK信号通路调控内皮细胞收缩、破坏细胞-细胞间粘附、破坏细胞-基质间粘附,导致内皮屏障结构紊乱,从而引起内皮细胞通透性改变。