【摘 要】
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自2019年12月下旬新型冠状病毒肺炎爆发以来,新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情已波及到全球各国,成为重大公共卫生事件。为研究治疗COVID-19的有效方法世界各国都付出了巨大的努力,但目前尚无针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）引起的COVID-19的特殊抗病毒药物。中和抗体是对抗病毒最有效的工具。抗体是指免疫系统在受到病毒等抗原刺激后由人体产生的保护性蛋白质,它们
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自2019年12月下旬新型冠状病毒肺炎爆发以来,新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情已波及到全球各国,成为重大公共卫生事件。为研究治疗COVID-19的有效方法世界各国都付出了巨大的努力,但目前尚无针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）引起的COVID-19的特殊抗病毒药物。中和抗体是对抗病毒最有效的工具。抗体是指免疫系统在受到病毒等抗原刺激后由人体产生的保护性蛋白质,它们识别特定的外来物质,有助于清除入侵的病原体或防止它们进入细胞。获得抗病毒抗体的途径大致可分为两类:一类是从具有免疫力的人或动物的血液中分离出来的;另一类方法是筛选、设计抗体,并在体外大量制备抗体药物,这类药物有着较好的抗病毒活性,且具有特异性,例如在埃博拉病毒以及“中东呼吸系统综合症”冠状病毒“抗击战”中发挥了巨大的功效。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定,是确保抗体类药物有效性的重要质控指标,本课题对新型冠状病毒抗体药研发过程中的生物学活性进行了研究,主要研究内容包括:1.1新型冠状病毒抗体结合活性方法研究本论文基于新型冠状病毒中和抗体的生物学活性,成功建立并优化了间接法测量新冠病毒中和抗体结合活性的方法,且经过验证,方法灵敏、特异、快速且稳定。同时为新冠病毒中和抗体质量研究、抗体筛选提供了参考,也为其它抗体类药物的生物学活性测定方法的建立提供了思路。2.2新型冠状病毒抗体竞争结合活性方法研究本论文基于新型冠状病毒中和抗体的生物学活性,成功建立并优化了测量新冠病毒中和抗体竞争结合活性的方法,且在对抗原RBD-m Fc包被浓度、抗体孵育时间、TMB显色时间有小的变动时,方法也表现出较好的耐用性;对方法进行了验证,可以看到该方法具有良好的准确度、精密度、专属性及线性。同时本方法通过补充新冠抗体同ACE2抗体的竞争能力,为检测新冠中和抗体的生物学活性提供了思路,也为新冠抗体质量研究、活性测定奠定了基础。3.3假病毒中和活性方法研究严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）是一种高致病性和传染性的病毒,由于活病毒有关实验必须要在生物安全3级条件下处理,这阻碍了疫苗和治疗药物的开发。假病毒因其安全性和多功能性而代替活病毒成为了有用的病毒学工具,尤其是针对新发现和重复出现的病毒,因此,借助VSV假病毒生产系统,科学家们开发了一种基于假病毒的中和试验,用于评价2级生物安全设施中的抗SARS-CoV-2中和抗体。本论文建立并验证一种基于细胞机制受体ACE2表达量的SARS-CoV-2假病毒中和活性研究方法,首先通过对比了血管紧张素转换酶2（ACE2）的蛋白表达和相对m RNA含量,从而筛选出ACE2的表达量最多的HEK293T-h ACE2细胞作为实验细胞,然后通过探索病毒与细胞的数量及比例,孵育时间等,建立并验证SARS-CoV-2假病毒中和活性研究方法。
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