第一部分：雌激素受体与血管平滑肌细胞表型蛋白在人类颅内动脉瘤上的表达目的：探讨正常人体动脉血管和颅内动脉瘤的血管平滑肌（Vascular Smooth Muscle Cell，VSMC）雌激素受体（Estrogen Receptors，ERs）表达变化，正常人体动脉与颅内动脉瘤VSMC表型蛋白α平滑肌肌动蛋白（αSmooth Muscle Actin，α-SMA）和结蛋白（Desmin，Des）表达变化及ERs表达变化与VSMC表型蛋白表达变化之间关系。方法：临床取材非动脉瘤患者手术区颈外动脉分支8例和颅内动脉瘤切除标本18例。标本采用4％多聚甲醛固定，低温OCT包埋，制成5μm切片，HE染色或PI染色观察对照动脉血管和颅内动脉瘤的形态。免疫组织化学法检测对照动脉血管和颅内动脉瘤ERs、α-SMA和Desmin的表达。应用Image-Pro-Plus 6.0软件检测阳性细胞表达水平光密度值（OD值）。实验数据采用SPSS13.0 for Windows统计软件进行方差分析。结果：动脉瘤瘤壁VSMC细胞排列紊乱，细胞形态变异，部分动脉瘤壁出现玻璃样变性。ERα和ERβ在正常动脉VSMC女性高于男性，并具有显著差异。（T=3.045，P=0.023和T=2.709，P=0.035）。颅内动脉瘤VSMC表达ERα和ERβOD值分别为0.2800±0.0958和0.3512±0.0848，均高于对照动脉血管表达水平（0.1800±0.0258和0.2299±0.0336），具有显著差异（T=3.174，P=0.004和T=3.877，P=0.001）。颅内动脉瘤VSMC表达α-SMA和Desmin的OD值分别为0.1371±0.0469和0.0961±0.0368，均低于对照动脉血管表达水平（0.3780±0.0427和0.3134±0.0581），具有显著差异（T=12.393，P＜0.001和T=11.604，P＜0.001）。VSMC ERs的表达与α-SMA和Desmin的表达存在相关性。结论：1．正常人类颈动脉系统血管VSMC ERs的表达水平存在差异，女性高于男性。2．人类颅内动脉瘤VSMC表达ERs水平升高与VSMC表型蛋白表达水平降低呈负相关，可能与颅内动脉瘤的形成有关。第二部分：雌激素受体与血管平滑肌细胞表型蛋白在人工诱导大鼠颅内动脉瘤上的表达目的：通过结扎SD大鼠右侧颈总动脉和双侧肾动脉后支诱导动脉瘤模型，探讨大鼠动脉瘤形成过程中VSMC ERs表达情况与α-SMA和Desmin表达情况之间的相关性。方法：随机挑选雌雄各15只SD大鼠，结扎右侧颈总动脉和双侧肾动脉后支诱导大鼠形成高血压，术后1周饲喂1％盐水。对照组雌雄各6只，正常喂养。6个月后处死大鼠，4％多聚甲醛灌流固定，获得ACA-OA标本。低温OCT包埋，制成5μm切片，HE染色或PI染色观察对照组和高血压诱导组ACA-OA形态。免疫组织化学法检测对照组和高血压诱导组ACA-OA ERs、α-SMA和Desmin的表达。应用Image-Pro-Plus 6.0软件检测染色切片的OD值。实验数据采用SPSS13.0 for Windows统计软件进行统计分析。结果：高血压诱导组左侧ACA-OA出现早期血管损伤5例和动脉瘤样病理变化10例，右侧ACA-OA无明显病理改变。正常雌性大鼠ACA-OA ERα和ERβ表达水平高于雄性大鼠（T=3.757，P=0.004和T=2.552，P=0.029）。高血压诱导组雄性大鼠左侧ACA-OA VSMC ERα和ERβ表达分别为0.2287±0.0573和0.2073±0.0696，均高于正常对照组表达水平（T=2.462，P=0.030和T=2.389，P=0.034）。高血压诱导组雌性大鼠左侧ACA-OA VSMCERα和ERβ表达分别为0.2870±0.0279和0.2621±0.0430，均高于正常对照组表达水平（分别为T=2.441，P=0.033和T=2.292，P=0.043）。高血压诱导组雄性大鼠左侧ACA-OA VSMCα-SMA和Desmin表达分别为0.1958±0.1057和0.1348±0.0430，均低于正常对照组表达水平（分别为T=3.314，P=0.006和T=5.351，P＜0.001）。高血压雌性大鼠动脉瘤样变化ACA-OAα-SMA和Desmin表达分别为0.2390±0.1161和0.1474±0.0448，均低于对照组表达水平（分别为T=2.800，P=0.017和T=4.958，P＜0.001）。雄性大鼠ACA-OA早期动脉损伤ERα和ERβ表达水平为0.1554±0.0412和0.10944±0.0327，与对照组相比无显著差异（T=0.098，P=0.925和T=0.443，P=0.673）。雌性大鼠ACA-OA早期动脉损伤ERα和ERβ表达水平分别为0.2392±0.0447和0.1920±0.0372与对照组相比无显著差异（T=0.225，P=0.829和T=0.299，P=0.773）。本实验大鼠VSMC ERs表达与VSMC表型蛋白之间存在相关性。结论：1．高血压诱导大鼠动脉瘤模型可以观察颅内动脉瘤病理演化过程。2．在大鼠颅内动脉瘤形成过程中，VSMC从收缩型向合成型转变与雌激素受体表达水平升高有关。3．Desmin表达水平降低可能是动脉血管损伤早期指征，可能预示动脉瘤形成。第三部分：雌激素受体α、β基因多态性与颅内动脉瘤形成的关系目的：研究ERα和ERβ基因限制性片段长度多态性（Restriction fragmentlength polymorphism，RFLP）与颅内动脉瘤关系。方法：2006年2月至2006年11月在解放军总医院神经外科住院患者中选取颅内动脉瘤患者55例，非动脉瘤患者66例作为对照组。平均年龄分别为46.62±L17.62岁和47.85±12.96岁。采集静脉血5ml，提取基因组DNA，PCR扩增ERα第1内含子、ERβ第5外显子和第8外显子片段。扩增片段分别进行限制性内切酶切，ERα第1内含子限制性内切酶为PvuⅡ和XbaⅠ，ERβ第等5外显子为RsaⅠ，第8外显子为AluⅠ。酶切片段，代表多态性位点的基因型，2％凝胶电泳分析条带。实验数据采用SPSS13.0 for Windows统计软件进行统计分析。结果：ERα第1内含子扩增片段长度为1.3kbp，ERβ第5外显子片段和第8外显子片段长度分别为156bp和307bp。PvuⅡRFLP结果显示对照组PP占12.1％，Pp占50.0％，pp占37.9％；颅内动脉瘤组PP占21.8％，Pp占60.0％，pp占18.2％。对照组与颅内动脉瘤组之间有显著差异（χ²=6.280，P＜0.05）。XbaⅠRFLP结果显示对照组XX占1.5％，Xx占36.4％，xx占62.1％；颅内动脉瘤组XX占1.8％，Xx占40.0％，XX占58.2％。对照组与颅内动脉瘤组之间无显著差异（χ²=0.198，P＞0.05）。RsaⅠRFLP结果显示对照组RR占53.0％，Rr占40.9％，rr占6.1％；颅内动脉瘤组RR占32.7％，Rr占63.6％，rr占3.7％。对照组与颅内动脉瘤组之间有显著差异（χ²=6.203，P＜0.05）。AluⅠRFLP结果显示对照组AA占54.5％，Aa占39.4％，aa占6.1％；颅内动脉瘤组AA占45.5％，Aa占49.0％，aa占5.5％。对照组与颅内动脉瘤组之间无显著差异（χ²=1.155，P＞0.05）。结论：1．ERα第1内含子PvuⅡRFLP和ERβ第5外显子RsaⅠRFLP多态性与颅内动脉瘤形成有关。2．ERα第1内含子PvuⅡ和ERβ第5外显子RsaⅠ位点的RFLP可能与ERs表达能力和蛋白结构变化有关，可能影响颅内动脉瘤的发生。第四部分：雌激素和他莫昔芬对体外培养大鼠动脉平滑肌细胞的雌激素受体和平滑肌细胞表型的影响目的：探讨17β-雌二醇和他莫昔芬对体外培养雌性大鼠胸主动脉VSMCERs和VSMC表型的影响。方法：体外培养大鼠胸主动脉VSMC。实验分为17β雌二醇E₂（1）10^-9M、E₂（2）10^-8M和E₂（3）10^-7M；TAM（1）10^-8M、TAM（2）10^-7M和TAM（3）10^-6M；TAM10^-6M+E₂（3）10^-7M组；CON组。作用24h提取总RNA，RT-PCR分析ERα、ERβ、α-SMA和OPN mRNA片段相对浓度。结果：E₂（1）、E₂（2）和E₂（3）组均促进ERα和ERβ的表达（F=29.973，P＜0.001和F=66.186，P＜0.001），而各浓度的TAM不影响VSMC ERα和ERβ表达水平，但是10^-6M TAM可以阻断10^-7M的17β-雌二醇促进ERα和ERβ表达作用。E₂（1）、E₂（2）和E₂（3）组均可促进α-SMA的表达（F=173.836，P＜0.001），并可抑制OPN的表达（F=10.243，P=0.004）。而各浓度TAM不影响VSMCα-SMA和OPN的表达，并且10^-7M的17β-雌二醇促进α-SMA和抑制OPN表达作用可被10^-6M的TAM阻断。结论：1．雌激素可以促进体外培养的VSMC表达ERα和ERβ增加，同时促进体外培养VSMC由合成型向收缩型转变。2．受体表达升高和VSMC表型转化过程是雌激素依赖的，可被TAM阻断。3．ERs的表达上调促进了雌激素对VSMC表型转化的调节作用。