青霉素酰化酶性质及应用研究

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本论文研究了有机溶剂、温度、pH值对工业上广泛应用的青霉素酰化酶活性的影响,优化反应条件,如反应介质、温度、pH值、底物浓度等因素,研究了青霉素酰化酶在催化合成阿莫西林中的应用。主要进行了如下工作:1.根据LogP规律筛选出12种有机溶剂,考察了它们对青霉素酰化酶活性的影响。在pH值等于7的缓冲溶液和有机溶剂各占50%(V/V)的体系中,通过测定酶在此体系中活性的变化,选出对酶活性影响较小的有机溶剂。发现丙三醇、乙二醇、二甲基亚砜等有机溶剂对酶活性影响较小;研究了温度及pH值对青霉素酰化酶活性及稳定性的影响,发现在20℃~55℃的范围内,随着温度升高,酶的活力增大,但酶的稳定性逐渐降低,综合得出温度为40℃时酶的活性及稳定性较好;pH值在6~8的范围内变化时,酶的活力先升高后下降,pH值等于7.5时,活力达到最大,而酶稳定性却随着pH值增大而下降,综合得出pH值为6.5或7时酶的活性及稳定性较好。2.从对羟基苯甘氨酸邓钾盐出发制备了对羟基苯甘氨酸甲酯(p-OH-PGME),红外和熔点分析表明,制备的产物纯度较高。测定了对羟基苯甘氨酸甲酯(p-OH-PGME)在乙二醇,1,4-丁二醇,环己烷,正丁醇,丙三醇,叔丁醇等几种溶剂中的表观溶解度,发现对羟基苯甘氨酸甲酯(p-OH-PGME)在正丁醇,乙二醇等溶剂中的表观溶解度较好,底物的溶解性好在酶催化合成β-内酰胺抗生素反应中有利于向合成方向进行。3.优化了青霉素酰化酶催化合成阿莫西林的反应条件,分别考察了温度、pH值、底物浓度以及不同反应介质时,6-APA的转化率和对羟基苯甘氨酸甲酯(p-OH-PGME)的水解率,得出较理想的反应条件为:乙二醇-缓冲溶液体系、温度为20℃、溶液pH值为6.5、底物6-APA浓度为75 mmol/L、原料浓度配比:6-APA: p-OH-PGME为1:2。
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