副流感病毒5型（Parainfluenza Virus 5,PIV5）也被称为犬副流感病毒,是犬科、猫科等动物呼吸道疾病的主要病因,给我国养犬业乃至其他养殖业造成了严重的损失。副流感病毒5型是RNA病毒,属于副黏病毒科,腮腺炎病毒属,全基因总长度为15246bp,包含7段基因,即:NP、V/P、M、F、SH、HN、L。据血清学调查显示,该病毒呈世界性分布,且宿主范围广,犬、鼠、牛、猪等动物感染此病毒均见报道。本文所研究的副流感病毒5型是由广东某动物园提供的小熊猫、东北虎、华南虎分离到的。此前,关于小熊猫感染副流感病毒5型的病例还未见报道,虎源感染此病毒虽有依据,但未进行深入研究,相关序列还未能在NCBI上查到。因此,对分离到的小熊猫源和虎源副流感病毒5型进行全基因扩增意义重大,可以此了解它们的遗传进化规律,为副流感病毒5型的预防、治疗及后续相关疫苗的研究提供依据。本研究于2014²016年,收集疑似副流感病毒5型（PIV5）感染病例样品14份（小熊猫4份,非洲狮4份,东北虎1份,华南虎1份,环尾狐猴4份）经研磨、离心、过滤等处理,接种Vero细胞,进行病毒的分离培养,并观察细胞病变。收获病毒并对此进行副流感病毒5型的鉴定。本试验成功分离出3株副流感病毒5型,分别命名为ZJQ-221（小熊猫）、PIV5-SR（东北虎）、PIV5-SC（华南虎）,阳性率为21.4%（因动物园采样不便,样品数量有限）。三种病毒液接种到Vero细胞上,传至第三代后能使Vero细胞出现空泡,拉网的现象。通过透射电镜观察到,病毒液中有呈圆形,含囊膜,直径在50²00nm的病毒颗粒。设计12对特异性引物,对小熊猫和东北虎分离株全基因作分段扩增,均获得预期目的大小条带。测序、剪切、拼接获得两条完整的全基因序列。分析比对序列时发现,两株病毒与20株参考毒株核苷酸序列相似性分别为97.2%⁹9.8%和97.1%⁹9.7%,推导氨基酸序列相似性分别为97.2%⁹8.8%和97.7%⁹9.5%。两株病毒均与2009年从韩国犬源分离到的1168-1分离株核苷酸相似性最高,分别高达99.8%和99.7%,核苷酸序列相对1168-1分别有34和43处发生突变;推导氨基酸序列相似性分别高达98.8%和99.5%,分别有11和25处变化;建立遗传进化树表明,两种病毒均与韩国犬源1168-1分离株亲缘关系最近,与英国人源副流感病毒5型分离株PIV5-LN和RQ关系最远。对昆明小鼠进行该病毒的致病性研究,将小鼠分别接种25μL和50μL 10⁶TCID₅₀/100μL的PIV5-SR病毒液,25μL和50μL 10⁶ TCID₅₀/100μL的ZJQ-221病毒液,接种25μL和50μL DMEM培养基作为对照。接毒组小鼠毛发紊乱,精神状态不佳,根据小鼠的体重变化说明病毒对小鼠的生长有抑制作用,且病毒剂量大的抑制作用较明显。接毒8天后颈椎脱臼处死小鼠,剖检取各脏器,发现肺脏有出血点,间质变宽,RT-PCR检测到各脏器均含有副流感病毒5型,说明该病毒对小鼠具有感染性;取肺脏作病理切片,发现肺泡壁增厚,有炎性细胞浸润。本研究表明,小熊猫源和东北虎源副流感病毒5型对昆明小鼠具有一定的致病性。