目的HBV可经胎盘引起胎儿感染，此即HBV宫内传播。有关HBV宫内传播机制，国内外报道较少。自1992年以来，我室进行了系统研究，提出了HBV宫内感染经血源性和细胞源性两条途径传播的假说。但需要大量的研究去证实。胎盘滋养层细胞作为胎盘屏障的第一层细胞，直接与母亲血液接触，可能是HBV侵入胎盘的关键部位。但HBV是如何进入滋养层细胞的？其确切机理国内外尚未见报道。体内研究初步显示，HBsAg阳性孕妇胎盘滋养层细胞上存在HBsAg-抗HBs复合物，同时存在IgG FcR。综合目前国内外研究现状，本文拟进行体外HBV模拟感染培养的人胎盘滋养层细胞的实验研究。 方法 取妊娠6～10wk、发育正常、HBV感染指标全阴性的新鲜流产胎盘组织，挑取绒毛，用胰蛋白酶（0.25％）-DNaseⅠ（0.15U/ml）联合消化，经多种方法反复纯化，获取纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞。用流式细胞仪检测培养的滋养层细胞表面IgG FcR的表达情况。将状态良好的对数生长期人绒毛膜滋养层细胞分为6组，分别加入HBsAg-anti-HBs复合物，热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清和高滴度anti-HBs阳性血清共同孵育物，热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清，HBsAg，热灭活的正常 胃曰旱巨大学项士学位任工 人血清，及正常细胞培养液（空白对照组）继续培养。分别在12h，24h，36h，48h， 60h，72h时收集各细胞铺片，免疫组化检测细胞的感染状况。 结呆 经胰蛋白酶（0．25o）－DNase（0．15U／IIl）联合消化法获得的人 绒毛膜滋养层细胞，角蛋白染色阳性率超过95％，台盼蓝排斥实验检测细胞 存活率超过90％，符合后续实验要求。流式细胞仪检测结果显示培养的人绒 毛膜滋养层细胞表面存在 F。Y Rill的高表达。给培养的人绒毛膜滋养层细胞 加人不同的因子，正常人血清组细胞和空白对照组细胞除了随着孵育时间延 长，密度不断增加外，细胞状态不受所加因子的影响。其它各组细胞在12h、 24h时，各细胞铺片生长良好，密度适中。36h时，细胞过于致密，细胞间界 限不清，趋向死亡。48h后，细胞出现脱落现象，并卷曲死亡。用ani－ns 免疫组化检测12h、24h、36h时收集的细胞铺片，发现HBSAg－an－HBS复 合物组细胞和热灭活的HBsAg、HBeAg、antiHBc均阳性血清和 高滴度ni－HBs阳性血清共同孵育物组细胞出现较多HBsAg阳性信号，热 灭活的HBsAg、HBe＾g、am·HBc均阳性血清组细胞亦有HBsAan阳性信号出 现，其它各组细胞均未发现HBsAg阳性信号。 结论 体外培养的人胎盘滋养层细胞可将HBSAg－抗HBS复合物中的 HBs屿“摄人”胞内，而不能将单独的HBsAs“摄入”胞内。因此，我们推测， 感染HBV的母亲，其血液中的HBsAg与所产主的抗HBs形成HBsA旷抗HBs复 合物，复合物中抗 HBS的 FC段与滋养层细胞上的 FC Y Rill相结合，通过 F。 Y Rm介导的内化作用，将 HBSAg带入滋养层细胞内，从而引起胎盘的滋养层 细胞受到感染。