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内容摘要:本文共分两章,第一章是以小新月菱形藻(Nitzschia closterium minutissima Allen et Nelson)和牟氏角刺藻(Chaetoceros muelleri)为实验材料,用包埋-玻璃化法对两种材料进行了超低温(-196℃)保存研究。第二章为植物种质资源超低温保存的综述。包埋-玻璃化法是在包埋脱水法和玻璃化法基础上发展起来的超低温保存植物种质的新技术。它结合了包埋脱水法和玻璃化法的优点于一身,具有能同时处理大量材料,处理后恢复生长快,对材料的毒害作用小等优点,已在20余种高等植物的种质保存中获得成功。但此法在藻类方面的报道几乎没有,本实验填补了此项空白,并证明了该法对藻类冰冻保存的可行性。本实验中,探讨玻璃化溶液(PVS)配方、装载液浓度和装载时间、脱水时间以及洗涤过程对冰冻保存存活率的影响。结果表明:1.PVS配方对冰冻保存存活率的影响在本实验选定的7种玻璃化配方中,PVS2配方适合两种硅藻的冰冻保存。2.PVS脱水时间对冰冻保存存活率的影响将放入100%PVS溶液中的胶球分别处理0、20、40、60、80、100 min。结果发现:对小新月菱形藻和牟氏角刺藻的最适时间都为60 min。3.装载液浓度和装载时间对冰冻保存存活率的影响在装载时间选取的五个点0、20、40、60、80、100 min中,经实验证明:在25%PVS浓度装载的条件下,小新月菱形藻和牟氏角刺藻都处理60 min效果最好;在50%PVS浓度装载的条件下,小新月菱形藻处理60 min效果最好;牟氏角刺藻处理40 min效果最好。对于装载液的浓度选择上看,采用稀释到50%的PVS浓度最适合两种硅藻的冰冻保存。4.洗涤液中蔗糖浓度、洗涤方法、洗涤时间对冰冻保存存活率的影响复温后,根据蔗糖浓度不同选取五种洗涤液,经实验证明:小新月菱形藻采用蔗糖梯度洗涤利于藻细胞的存活(初始密度为1mol·L-1);牟氏角刺藻采用1.2 mol·L-1蔗糖洗涤利于藻细胞的存活。对于洗涤处理的时间,在我们选取的0、10、20、30、60 min五个点中,处理30 min是最适合两种硅藻的冰冻保存。综上,经优化组合,可得两种硅藻冰冻保存的最适条件:小新月菱形藻在0℃下,经50%PVS2装载60 min,100%PVS2脱水处理60 min,20℃蔗糖梯度(初始浓度1 mol·L-1)洗涤30 min,得最大存活率74.1%。牟氏角刺藻在0℃下,经50%PVS2装载40 min,100%PVS2脱水处理60 min,20℃1.2 mol·L-1蔗糖洗涤30 min,得最大存活率48.2%。