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目的:经支气管镜应用新型冷冻探针对良性气道狭窄动物模型进行治疗,以探讨肉芽组织增生及冷冻治疗机制,并评价新型冷冻探针治疗良性气道狭窄的效果。选取试验用比格犬55只,雌雄不限,体重约10kg13kg。其中30只试验犬用于肉芽组织增生及冷冻治疗机制的研究,25只试验犬用于新型冷冻探针冷冻效果的研究。试验中所用新型冷冻探针为课题组前期开发的以Ni-Ti形状记忆合金毛细管为材料,基于记忆合金法试制而成,具有自弯曲功能的冷冻探针。一、肉芽组织增生及冷冻治疗机制1.方法:（1）试验犬左侧肺后叶支气管为对照侧,以探讨肉芽增生机制;右侧肺后叶支气管为治疗侧,以探讨冷冻治疗机制。（2）采用随机数字表法选出5只正常对照试验犬,其余试验犬双侧肺后叶支气管均进行氩等离子体凝固（Argon plasma coagulation,APC）烧灼,以建立良性气道狭窄模型,并在良性气道狭窄模型制备后第7天对余下实验犬右侧肺后叶支气管使用新型冷冻探针进行冷冻治疗,左侧肺后叶支气管不进行治疗。（3）试验犬在良性气道狭窄模型制备前、制备后的第24小时、72小时、7天（即治疗侧冷冻治疗时）、9天（即治疗侧冷冻治疗后第2天）、14天（即治疗侧冷冻治疗后第7天）等时相点各随机处死5只,取各时相点烧灼、冷冻区域支气管组织进行光镜观察;使用免疫组织化学的方法检测分化抗原簇105（Cluster of differentiation105,CD105）在烧灼、冷冻区域支气管组织中的表达以观察新生微血管情况;同时采用免疫组织化学的方法对白介素1β（Interleukin 1β,IL-1β）、白介素6（Interleukin 6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）及血管内皮生长因子A（Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）在支气管组织中阳性细胞表达情况进行检测。2.结果:（1）光镜观察:良性气道狭窄模型制备后,支气管黏膜层、黏膜下层受到损伤,黏膜下结缔组织及软骨未受损伤,对照侧和治疗侧支气管表现均无差异。（2）新生微血管观察:通过观察CD105在支气管组织表达情况可知治疗侧支气管组织中微血管数量在良性气道狭窄模型制备后第14天,即冷冻治疗后低于对照侧（P<0.05）。（3）IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1及VEGF-A在支气管组织表达情况:良性气道狭窄模型制备后对照侧支气管组织中IL-6、TNF-α、TGF-β1及VEGF-A表达水平升高;良性气道狭窄模型制备后第14天,治疗侧支气管组织中VEGF-A、IL-6表达水平较同期对照侧低。二、新型冷冻探针治疗效果1.方法:（1）试验犬左侧肺后叶支气管为对照侧,右侧肺后叶支气管为治疗侧。（2）采用随机数字表法选出5只正常对照试验犬,其余试验犬双侧肺后叶支气管均进行APC烧灼,以建立良性气道狭窄模型,并在良性气道狭窄模型制备后第7天对余下试验犬右侧肺后叶支气管（治疗侧）使用新型冷冻探针进行冷冻治疗,左侧肺后叶支气管（对照侧）不进行治疗。（3）对试验犬良性气道狭窄模型制备前、制备后的一般情况进行观察;两肺支气管在良性气道狭窄模型制备前、制备后第7天（即治疗侧冷冻治疗时）、14天（即治疗侧冷冻治疗后第7天）、21天（即治疗侧冷冻治疗后第14天）、28天（即治疗侧冷冻治疗后第21天）等时相点进行支气管镜下观察,并测量支气管内径;试验犬在相应时相点处死,进行大体标本的观察,并取各时相点烧灼、冷冻区域支气管组织进行光镜观察,使用免疫组织化学的方法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1及VEGF-A在支气管组织中阳性细胞的表达情况。2.结果:（1）支气管镜下观察（1）支气管镜下大体观察:良性气道狭窄模型制备前、制备后的第7天、第14天、第21天对照侧和治疗侧支气管表现无差异。良性气道狭窄模型制备后第28天,对照侧支气管较治疗侧缩小明显。（2）支气管内径测量:良性气道狭窄模型制备后第7天、第14天、第21天治疗侧支气管狭窄率与同期对照侧支气管狭窄率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;良性气道狭窄模型制备后第28天治疗侧支气管狭窄率与同期对照侧支气管狭窄率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）支气管组织病理学观察（1）大体标本观察:良性气道狭窄模型制备前、制备后第7天、第14天、第21天及第28天对照侧和治疗侧支气管表现均无差异。（2）光镜观察:良性气道狭窄模型制备前、制备后第7天、第14天光镜观察支气管黏膜、黏膜下层及外膜对照侧和治疗侧支气管表现均无差异,良性气道狭窄模型制备后第21天、第28天治疗侧较对照侧支气管各层恢复更快。（3）IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1及VEGF-A在支气管组织中阳性细胞表达观察:治疗侧和对照侧支气管组织中IL-1β表达水平在良性气道狭窄模型制备后第21天和第28天差异有统计学意义（P<0.05）,IL-6表达水平在良性气道狭窄模型制备后第14天和第21天差异有统计学意义（P<0.05）,TNF-α表达水平在良性气道狭窄模型制备后第28天差异有统计学意义（P<0.05）,TGF-β1表达水平在良性气道狭窄模型制备后第14天、第21天和第28天差异有统计学意义（P<0.05）,VEGF-A表达水平在良性气道狭窄模型制备后第14天和第28天差异有统计学意义（P<0.05）。三、结论1.IL-6、TNF-α、TGF-β1及VEGF-A的过表达会促进肉芽组织增生,瘢痕组织形成;冷冻治疗可使VEGF-A、IL-6的表达水平降低,抑制肉芽组织增生。2.新型冷冻探针治疗肉芽增生所致的气道良性狭窄效果较佳,冷冻治疗是一种非即时效应的治疗措施。