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表观遗传学是遗传学分支学科,指在不改变DNA序列的前提下,基因或者蛋白表达发生变化,并可以在细胞的生长和传代过程中稳定传递,主要包括组蛋白的共价修饰,DNA甲基化,基因沉默,染色质重塑,以及非编码RNA编辑等机制。表观遗传学与肿瘤的发生和转移有密切联系,肿瘤中存在表观遗传方式的异常。表观遗传学通过影响肿瘤抑制基因及其表达,促进肿瘤发生。组蛋白组成了核小体,它可以被多种化合物所修饰,如磷酸化、乙酰化和甲基化等,称为共价修饰,组蛋白的这些共价修饰作用主要发生在其N2末端,其中最为重要的是组蛋白乙酰化,组蛋白乙酰化会对肿瘤细胞的染色体结构以及基因的表达产生影响,从而使肿瘤的治疗更加乐观。组蛋白乙酰化和去乙酰化在细胞信号转导、分裂、凋亡、细胞内的DNA修复、以及及染色体组装等方面起着重要作用。各种抗肿瘤药物有着不同的作用特点,不同类型的肿瘤使用不同的抗肿瘤药物,其作用机制各不相同,但多种针对实体瘤或血液系统肿瘤的抗肿瘤药物均可与组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合,起到协同作用,研究发现,抗肿瘤药物与组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合后,比单药使用抗肿瘤药物组生存率高,对肿瘤细胞杀伤作用显著,并且其疗效有统计学差异。组蛋白去乙酰化酶抑制剂在恶性肿瘤的治疗作用已受到广泛认可。组蛋白去乙酰化酶抑制剂目前常常用来与DNA甲基转移酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、激素、化疗药物如紫杉醇及铂类等、酪氨酸激酶受体阻滞剂等药物联合使用。目前在肺癌的研究中,组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合铂类药物的报道较少,为研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联合用药,对肺癌细胞的影响,并对其作用机制进一步探索,设计了本次的实验。目的：研究曲古抑菌素A (trichostatin A,TSA)联合顺铂(cisplatin)对肺腺癌细胞株A549凋亡的影响,以及药物处理后A549细胞中cFLIP、caspase-8蛋白的表达情况。方法：1、使用PRMI1640培养液培养肺腺癌A549细胞株,将细胞分为四组：1)、对照组2)、TSA250nmol/L处理组3)、Cisplatin 10μg/mL处理组4)、TSA250nmol/L+ Cisplatin 10μg/m L联合处理组,药物处理24h后,使用光学显微镜观察各个组细胞形态学的变化。2、使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的抑制率,将细胞分为10组：1)、空白对照组2)、TSA 250nmol/L处理组3) Cisplatin 5.3μg/mL处理组4)TSA250nmol/L+ Cisplatin 5.3μg/mL处理组5) Cisplatin 9μg/m处理组6)TSA250nmol/L+Cisplatin 9μg/mL处理组7) Cisplatin 13μg/mL处理组8)TSA250nmol/L+ Cisplatin 13μg/mL处理组9) Cisplatin 20μg/mL处理组10)TSA250nmol/L+ Cisplatin 20μg/mL处理组。测定不同浓度顺铂处理细胞后,对细胞抑制率,以及不同浓度顺铂联合TSA处理细胞后,对细胞的抑制率。3、按照1中的分组方法将细胞分为4组,使用Hoechst33258染色法显示不同处理组细胞凋亡的特点。4、按照1中的分组方法将细胞分为四组,使用Western blot法检测cFLIP、 Pro-caspase-8及Caspase-8蛋白表达的变化。实验数据使用SPSS 15软件进行χ2检验、t检验,p<0.05表示差异有统计学意义。结果：1、光学显微镜下观察四个组药物处理后细胞形态的变化①对照组：细胞排列规则,紧密贴壁,细胞边界清晰,未看到悬浮死细胞。②TSA250nmol/L处理组：细胞变大,有些细胞呈并指状,细胞间隙增大,可见少量悬浮死细胞。③Cisplatin 10μg/mL处理组：细胞比对照组变小、变圆,发生皱缩,可见较多死细胞。④TSA250nmol/L+ cisplatin 10μg/mL联合处理组：与前三组相比,细胞密度明显下降,细胞发生皱缩,可见大量死细胞悬浮。2、四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测不同浓度顺铂对细胞的抑制作用,以及不同浓度顺铂联合TSA对细胞的抑制作用使用不同浓度的顺铂处理细胞,发现顺铂对细胞的抑制作用与顺铂的浓度呈正相关。随着顺铂浓度的增加,细胞凋亡率增加。当联合TSA后,各组对细胞的抑制率均升高。Cisplatin 5.3μg/mL、TSA250nmol/L+ Cisplatin 5.3μg/mL细胞抑制率分别为13.68%、26.42%。Cisplatin 9μg/mL、TSA250nmol/L+ Cisplatin 9μg/mL细胞抑制率分别为28.73%、46.72%。Cisplatin 13μg/mL、TSA250nmol/L+ Cisplatin 13μg/mL细胞抑制率分别为44.58%、49.65%。Cisplatin 20μg/mL、TSA250nmol/L+ Cisplatin 20μg/mL细胞抑制率分别为51.12%、61.92%。顺铂与TSA联合对细胞的抑制明显高于单药组(p<0.05)。3、Hoechst33258染色法观察各组使用药物处理后细胞凋亡的特点各个组药物处理24h后,使用Hoeschst33258染色法观察细胞的凋亡特点,相比于对照组,TSA及Cisplatin药物单药处理组凋亡细胞增多,出现染色质凝集,核染色荧光增强,联合用药上述现象更加明显,荧光度增强,并可以观察到核裂解及凋亡小体。4、TSA联合Cisplatin对cFLIP蛋白表达量的影响使用TSA 250nmol/L联合Cisplatin 10μg/mL处理细胞24h后,单药处理组cFLIP蛋白表达量减少,相比对照组及单药处理组,联合用药组cFLIP蛋白表达明显减少。测定各个处理组蛋白灰度值,结果显示灰度值差异有统计学意义。5、TSA联合Cisplatin对caspase-8及其前体表达的影响TSA 250nmol/L联合Cisplatin 10μg/mL处理细胞24h后,单药处理组Pro-caspase-8表达减少,caspase-8蛋白表达增多,与对照组与单药处理组相比,联合用药组Pro-caspase-8明显减少,caspase-8蛋白明显增多,测定四个处理组蛋白灰度值,结果显示其蛋白表达差异有统计学意义。结论：TSA联合顺铂能够通过影响Caspase-相关信号通路增加A549细胞株的凋亡,TSA和顺铂联合具有协同作用。