在全球排名前十的恶性肿瘤中,肺癌的发病率和死亡率都是最高的。而在我国肺癌的发病人数和死亡人数都高居全球第一位。已有的研究表明,LARP7在胃癌、乳腺癌、心肌肥大等疾病中有重要的功能。LARP7通过调控细胞中正性转录延伸因子P-TEFb和端粒酶等分子的活性,调节细胞中基因的转录等过程,从而在肿瘤的发生发展及恶化过程中发挥重要的作用。本课题主要以肺癌细胞A549及在此基础上建立的稳定敲除LARP7的细胞株为研究平台,采用了多种生物学常用的技术手段研究LARP7在肺癌的发生发展及恶化过程中的功能与机制,如Western blot,PCR,过表达质粒,基因编辑,质谱等。主要内容包括:(1)在肺癌细胞A549中过表达LARP7,结果显示LARP7过表达以后,降低了细胞的生长和增殖速度;划痕试验表明,细胞的的迁移能力被抑制,侵袭实验表明,细胞的侵袭能力被抑制,EMT的很多标志物也分别被上调和下调。(2)利用基因编辑技术CRISPR/Cas9对细胞A549中的基因LARP7进行了敲除,发现细胞变得狭长且突触状明显,这些变化也符合细胞运动和转移能力增强的特征;同时细胞的生长和增殖速度增强,同时迁移能力和侵袭能力也明显增强,EMT的很多标志物也分别被上调和下调。(3)另外研究了敲除LARP7以后细胞转录水平的变化,发现RNA聚合酶ⅡCTD的磷酸化水平增加,促进基因的转录延伸过程。另外蛋白质组学的结果表明,LARP7敲除后促进P-TEFb由复合物7SK snRNP中解离,被募集到超级转录延伸复合物SEC中,从而调控基因的表达。另外,结果显示细胞内的NF-κB减少、Akt的磷酸化增加、p53异常高表达等细胞因子变化明显,表明可能是通过NF-κB和Akt等信号通路调节细胞的转移性等特性的。综上所述,本课题的研究结果表明了 LARP7在肺癌细胞中是一个重要的抑癌因子,它通过调控基因的转录延伸过程和某些信号转导途径中的相关因子,导致肺癌细胞的转移。