黄河鲤TCC相关基因克隆与表达研究

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kongshuai19900505
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病原侵染机体时,末端补体成分(terminal complement components,TCC)C6、C7、C8α、C8β和C9参与形成膜攻击复合物(Membrane attack complex,MAC),MAC能够贯穿细胞膜,最终导致靶细胞裂解。本文对黄河鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)TCC相关基因C8α、C8β和C9基因进行了克隆鉴定,使用RT-PCR技术对其在黄河鲤不同组织和早期发育阶段的表达进行分析,主要结果如下:分别使用简并引物扩增得到黄河鲤C8α、C8β和C9基因的中间片段,使用RACE扩增获得C8α的cDNA全长为2066nt,ORF为1785nt,编码595个氨基酸,与斑马鱼(Danio rerio)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和香鱼(Plecoglossus altivelis)C8α蛋白相似性分别为72%、53%和51%;C8β的cDNA全长为1994nt,ORF为1716nt,编码573个氨基酸,与斑马鱼、虹鳟、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)和牙鲆(Paralichthysolivaceus)C8β蛋白相似性分别为75%、61%、58%和56%;C9cDNA全长为2155nt,ORF为2028nt,编码675个氨基酸,黄河鲤C9与草鱼(Ctenopharyngodon idella)、斑马鱼、虹鳟和牙鲆C9的氨基酸相似性分别为77%、75%、49%和49%。多序列比对结果显示黄河鲤C8α、C8β和C9存在TCC基因共有的28个保守的半胱氨酸残基,结构域搜索显示黄河鲤C8α、C8β和C9都含有TSP、LDL-R、 MACPF和EGPF等保守的结构域。RT-PCR检测C8α、C8β和C9转录本在黄河鲤不同组织和早期发育阶段中的表达,结果显示3个基因在鳃、肝胰腺、肾脏、脾脏、头肾、心脏、肠道、脑、肌肉等被检组织和血液中呈组成型表达,其中在肝脏中表达量最高。在黄河鲤早期发育阶段,C8α和C8β基因表达呈现相似的规律,在囊胚期已有表达,两个基因从囊胚期、原肠胚期、尾芽期到心跳期,基因表达量随着发育进程呈现增加的趋势,初孵仔鱼C8α基因表达水平相对下降,出膜第2d后表达量增加并持续稳定表达,C8β基因在出膜前期和初孵仔鱼阶段表达水平相对下降,出膜第2d后表达量增加并稳定表达。C9基因在胚胎发育早期阶段的心跳期才检测到表达,初孵仔鱼期表达量下降,出膜第2d时表达量增加,出膜第5d后表达量持续下降。
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