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背景： 食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤，发病率及死亡率均较高。尽管目前诊断和治疗技术不断提升，但大多数食管癌患者预后仍很差。炎症刺激在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。肿瘤相关性炎症是由炎性因子或炎性细胞所致的肿瘤细胞信号通路异常，是肿瘤的一个重要特征。CRI包括2个信号通路，即外源性通路和内源性通路。外源性通路由增加肿瘤风险的炎症环境诱导，内源性通路由可以引起炎症和肿瘤的基因改变所致。无论是外源性通路还是内源性通路，都可以激活一系列转录因子，例如核转录因子κB（NF-κB）、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）等。而这些转录因子又进一步调节炎性介质的产生，包括细胞因子、趋化因子、环氧合酶2（COX-2）等，从而形成一个肿瘤相关性炎症的微环境，影响肿瘤发展的各个方面。miRNAs是调控基因表达的重要分子，而miRNAs是否参与调控肿瘤相关性炎症及其分子机制是研究的热点。microRNA-302b（miR-302b）属于miR-302-367簇，与胚胎干细胞干性的维持和细胞自我更新与扩散的特性有关。本项目组前期利用miRNA芯片分析食管癌及反流性食管炎miRNAs表达谱的变化，并对5种食管癌细胞系进行检测后发现miR-302b表达水平显著下调；进一步利用多种靶基因预测软件对miR302b的靶基因进行预测，发现miR-302b与4个潜在靶基因（TGFBR2、CXCR4、ERBB4、IRF2）的关系较为密切，而这些潜在靶基因也在肿瘤相关性炎症中发挥重要作用。因此项目组推测miR-302b是肿瘤相关性炎症的一个关键调节分子，在食管癌肿瘤相关性炎症调控中发挥重要作用。 目的： 利用食管癌细胞株模型以及食管癌组织标本，通过探讨miR-302b的表达对食管癌肿瘤相关性炎症信号通路的影响以及miR-302b与其潜在靶点相关性分析，为探究食管癌肿瘤相关性炎症的调控机制奠定新的理论基础，亦为食管癌靶向治疗提供新的思路。 方法： 本研究分为3个部分 ①不同炎症相关细胞因子对食管癌细胞系miR-302b表达的影响 选择4株食管癌细胞及1株正常食管上皮细胞作为对照，分别用含LPS、IL-6、IFN-γ、TGF-β的RPMI1640培养基以及普通RPMI1640培养基培养细胞，分别于刺激0h、12h、24h、48h提取总RNA，使用qRT-PCR检测miR-302b表达水平的变化。 ② miR-302b表达调控后对食管癌细胞CRI相关通路的影响 使用前期构建的miR-302b前体序列载体（pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR-302b）转染相对低表达miR-302b的食管癌细胞（TE-11、Eca109）；使用miR-302b抑制剂（2-O-me-anti-302b）转染相对高表达miR-302b的食管癌细胞（TE-1、OE33）。转染48小时后提取总RNA并使用 qRT-PCR检测miR-302b的表达水平，确定调控miR-302b表达的水平成功。调控不同的食管癌细胞miR-302b表达的水平成功后，分别使用qRT-PCR和Western Blots技术检测CRI的关键转录因子NF-κB、STAT3、HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平的变化。 ③食管癌标本miR-302b与潜在靶基因的表达相关性分析 选择15例食管癌及对应的癌旁组织标本，分别提取总RNA和总蛋白，使用qRT-PCR和Western Blots技术检测miR-302b的表达水平及miR-302b的4个潜在靶基因（TGFBR2、CXCR4、ERBB4和IRF2）蛋白表达水平。然后通过Pearson相关系数分析miR-302b与4个潜在靶基因的相关性。 结果： ①食管癌细胞 miR-302b的表达水平较正常食管上皮细胞的表达水平低；炎症相关细胞因子可以抑制食管癌细胞miR-302b的表达水平，而且随着刺激时间的延长，对miR-302b的抑制率逐渐升高；而正常食管上皮细胞miR-302b的表达无明显变化。 ②转染48小时后，成功调控miR-302b的表达水平。qRT-PCR结果显示，无论上调还是下调miR-302b的表达，3个转录因子NF-κB、STAT3及HIF-1α的mRNA均无明显变化，说明miR-302b对3个转录因子 mRNA表达无显著影响。Western Blots结果显示，上调miR-302b表达水平后，3个转录因子蛋白表达水平均较mock组和NC组显著下调；相反下调 miR-302b表达水平后，3个转录因子蛋白表达水平均较mock组和NC组显著上调。这说明miR-302b能够显著抑制NF-κB、STAT3及HIF-1α的蛋白表达水平。 ③食管癌标本中miR-302b的表达显著低于相邻的非肿瘤组织；而miR-302b的四个潜在靶基因（TGFBR2、CXCR4、ERBB4、IRF2）在食管癌中的表达较相邻的非肿瘤组织显著升高。Pearson相关系数分析结果表明miR-302b与4个潜在靶基因的表达呈负相关，因此miR-302b可能在转录后水平调控4个潜在靶基因的表达。 结论： miR-302b的表达与食管癌肿瘤相关性炎症具有相关性；其在转录后水平负性调节CRI关键转录因子NF-κB、STAT3及HIF-1α的表达。miR-302b可能通过负性调节其靶点TGFBR2、CXCR4、ERBB4、IRF2的表达来实现对CRI关键转录信号通路（NF-κB、STAT3及HIF-1α）调控。