大肠埃希菌(Escherichia coli)俗称大肠杆菌,是典型的革兰氏阴性杆菌,兼性厌氧生长。致病性大肠杆菌能引起动物多种类型的疾病,发病率和死亡率较高。随着规模化养殖的发展,临床应用抗菌药物虽对细菌性感染的防控起到了积极作用,但随着抗菌药物的大量和不合理应用,致使近年来大肠杆菌耐药株迅速增加,耐药谱不断扩大,病菌耐药性问题越来越突出,已成为全世界的一个难题。大肠杆菌的耐药形成机制有多种,其中耐药质粒的广泛流行,导致了大肠杆菌的耐药和多重耐药现象日益加重,给大肠杆菌病的防治带来严重的障碍。采取浙江省规模化猪场发生典型仔猪断奶腹泻和仔猪黄、白痢发病猪的肛试粪样或死亡仔猪心血和肝脾等脏器,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验等,鉴定得到50株大肠杆菌。通过WHO推荐的Kirby-Barer法测定其对16种抗菌药物的耐药性。结果表明,在16种抗菌药物中,分离菌株对氨苄青霉素、阿莫西林、强力霉素、林可霉素则表现出极其高的耐药性；耐药率均达到100%,对四环素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明、恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素也有很高的耐药性,耐药率分别为98%、88%、75%、70%、70%、64%、58%和54%。进一步的耐药谱分析表明,所有大肠杆菌分离株均表现出多重耐药性：对6-8种抗菌药物耐药的有14株,对9-11种和12-14种抗菌药物耐药分别都有18株,并且以耐药8-12种居多,占检测菌株的78%,其中对12种抗菌药物耐药的菌株所占比例最高,达24%。应用碱裂解法,对其中48株细菌进行质粒抽提,结果菌株的质粒获得率为100%。经质粒图谱分析,表明每株菌都含有大小和数量不等的质粒条带,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株则不同。对照这些菌株的质粒图谱与耐药谱发现,在多数情况下,质粒谱带较多的菌株,一般耐药谱相对较广。另外,同起爆发的流行菌株具有相同或相似的质粒谱,但其耐药谱则可同可不同,说明质粒谱的稳定性较耐药谱强。大小约9kb、130kb的质粒在我们分离的大肠杆菌中出现频繁,其中所有菌株都携带9kb质粒,提示个别较大质粒在本次调查的菌株中非常流行。选取其中30株细菌将其质粒转化受体菌E.coli TG1,结果都能使受体菌获及部分抗性,证实耐药性可通过质粒转化在不同的菌株间横向传递。转化试验用Amp、Chl、Gen、Kan、Tet5种抗性平板筛选,结果耐Amp、Chl、Gen、Kan、Tet质粒分别为66.7%、60%、30%、56.7%和80%,证实质粒介导耐药是大肠杆菌耐药性发生的重要机制。同时试验将各抗生素平板上的转化子相互点种得到介导多重耐药的质粒。提取转化子的质粒经电泳发现,所有转化子均有1条9kb左右的质粒带,表明少数分子量较大的质粒的流行是造成大肠杆菌多重耐药的重要因素。用限制性内切酶EcoR I、BamH I酶切这些质粒,发现对Amp等5种抗生素介导耐药类型相同的耐药质粒其酶切图谱相同或相近,提示浙江省特别是相同来源的猪源大肠杆菌携带的耐药质粒(9kb)很可能具有一定的同源性。本试验结果表明,浙江省规模化猪场大肠杆菌多重耐药现象突出,耐药质粒在介导耐药性传递引起耐药菌株流行方面具有重要作用,这将为消除耐药质粒和防制大肠杆菌病提供依据。