论文部分内容阅读
胞膜窖(Caveolae)是细胞质膜表面特异性内陷微区，主要由脂类和蛋白质组成。窖蛋白(Caveolins)是Caveolae的表面标记蛋白，是构成Caveolae的完整膜蛋白。窖蛋白至少有3种亚型，其中Caveolin-1(Cav-1)是Caveolae最重要的表面功能蛋白。胞膜窖和窖蛋白在多种细胞生物学功能中起关键作用。已有的研究表明Cav-1参与牙胚发育过程。 Shh是高度保守的信号通路，参与多个器官的发育过程。在牙胚发育中Shh信号持续存在，调控牙源性上皮区域的确定，牙尖的发育和牙根的形成，并在确定牙齿数目中有重要作用。研究表明Cav-1可协助Shh从胞内运输至细胞表面。虽然Cav-1和Shh都参与牙胚发育，两者又有功能上的联系，但牙胚发育过程中Cav-1与Shh信号通路间是否存在调控关系尚不明确。 目的： 通过对比观察Cav-1基因敲除小鼠与野生型小鼠下颌第一磨牙牙胚早期发育过程中Shh信号通路的表达，探讨Cav-1与Shh信号通路时空表达模式的关系，为深入研究Cav-1在牙齿发育中的作用提供参考。 方法： 收集胚胎发育13.5，14.5，15.5，16.5，17.5及18.5天的Cav-1基因敲除小鼠(KO)和同源野生型小鼠(WT)的下颌第一磨牙牙胚，经聚合酶链式反应(PCR)及免疫组织化学技术鉴定基因型。免疫组织化学技术检测Shh、Ptc-1、Ptc-2、Gli-1、Gli-2在不同发育时期牙胚组织中的表达，并行统计学分析。 结果： Shh、Ptc-1、Ptc-2、Gli-1、Gli-2在E13.5-E18.5，WT和KO胎鼠的下颌第一磨牙牙胚中均有表达，并呈现出不同的表达模式。Shh蛋白在上皮芽的顶端可见阳性表达，帽状期特异性地表达于釉结部位，钟状期表达于成釉细胞层。Ptc-1在E13.5表达于上皮芽及周围间充质中，E14.5-E17.5天表达于外釉上皮、内釉上皮、星网状层、中间层及邻近内釉上皮的牙乳头细胞中，E18.5天，外釉上皮、成釉细胞、中间层仍可见Ptc-1表达，但牙乳头中未检测到Ptc-1表达。Ptc-2在成釉器中的表达模式类似于Ptc-1，但在牙乳头中未能检测到Ptc-2的表达。Gli-1，Gli-2表达模式相似，E13.5表达于上皮芽及周围间充质中，E14.5-E18.5天，表达于成釉器的各层细胞和牙乳头细胞。而同时期的WT和KO两者之间Shh信号通路的蛋白表达水平无显著性差异。 结论： Cav-1基因敲除对小鼠下颌第一磨牙牙胚早期发育中Shh信号通路的时空表达模式无显著性影响。