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食物过敏是免疫介导的对某些食物产生的不良反应,通常由无害的食物蛋白抗原触发,是Ig E介导的速发型超敏反应,会引起胃肠道、皮肤和呼吸道以及心血管异常,甚至有过敏性休克风险,危及患者的生命。研究表明,肠道微生物群对健康的免疫调节和肠道屏障功能的发展至关重要,可以促进对病原体的免疫反应和对食物等无害抗原的全身性低反应性;益生菌可通过调节肠道菌群及其代谢产物,诱导口服免疫耐受,进而缓解食物过敏;此外,前期宏基因组测序研究发现,食物过敏人群和非过敏人群在益生菌干预前后存在具有显著差异的氨基酸代谢通路,益生菌,氨基酸代谢与食物过敏之间存在相关性,但是益生菌是否通过肠道氨基酸代谢缓解食物过敏,以及其中的免疫调节机制仍然不明确,有待进一步研究。鉴于此,本研究首先对过敏人群(A)与非过敏人群(NA)进行两个月的副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01)口服干预。研究发现PC-01对过敏具有明显的缓解作用,在过敏人群中,PC-01可以下调食物过敏人群血清中Th2相关细胞因子(IL-4,IL-13,Eotaxin等)和炎症相关细胞因子(IL-6,IL-17,IL-8,IL-1β等)的含量,下调嗜酸性粒细胞比例,上调Ig G2、Ig G4的含量,诱导并维持过敏人群肠道内s Ig A的高表达,促进肠道免疫反应;并通过测量粪便样品中氨基酸的含量,探究肠道氨基酸水平与过敏的关系,粪便中氨基酸水平与Ig E含量显著正相关,且存在高Ile,Leu,低s Ig A的特征过敏人群,PC-01的干预对其Ile,Leu含量有明显的下调作用,表明副干酪乳杆菌PC-01可以通过调节肠道氨基酸代谢缓解过敏反应;其次,利用体外细胞模型(树突状细胞,小鼠肠道上皮细胞,以及树突细胞与脾脏细胞的共培养模型),对氨基酸(Ile,Leu)的免疫调节机制进行深入探究。研究发现,Ile和Leu会诱导促过敏基因的表达,如树突状细胞(DC2.4)中的OX40L,IL-6和肠上皮细胞(CMT93细胞)中的TSLP,上调小鼠脾脏中Th2细胞的比例以及相关细胞因子IL-4、IL-13 m RNA的表达,促使Th1/Th2免疫平衡偏向Th2;mTOR信号通路抑制与SESN2基因干扰均会显著抑制氨基酸(Ile,Leu)对DC2.4,CMT细胞中促过敏基因表达的诱导作用,且与普通培养基组无显著差异,表明SESN2,mTOR信号通路介导氨基酸对食物过敏的诱导活性;最后,进行小鼠实验体内研究,对OVA诱导的食物过敏小鼠模型进行Ile,Leu与副干酪乳杆菌PC-01的联合干预,验证副干酪乳杆菌PC-01的抗过敏活性与氨基酸(Ile,Le)的促过敏活性,并深入挖掘副干酪乳杆菌PC-01通过氨基酸代谢缓解食物过敏的免疫调节机制。研究发现Ile,Leu会诱导小鼠脾脏中Th2细胞的比例上调,Th1与Treg的比例下调,当机体处于机体高Ile,Leu条件下时,会促进食物过敏反应的发生,验证了上述体外细胞实验的结论;当机体处于高Ile/Leu环境时,PC-01可以通过上调食物过敏小鼠脾脏中Th1和Treg细胞的比例,抑制Th2型免疫应答,进而缓解氨基酸诱导的促过敏反应;通过肠道菌群分析发现,PC-01会显著改善食物过敏小鼠的肠道菌群结构,减少食物过敏小鼠肠道在变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度,上调Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)的比值以诱导肠道免疫调节作用,改变小鼠粪便中的氨基酸水平,下调食物过敏小鼠肠道菌群中氨基酸代谢相关基因的相对丰度;同时,高Ile条件下PC-01可以显著上调食物过敏小鼠肠道菌群的物种丰富度且超过健康小鼠的水平;高Leu条件下PC-01会上调物种的多样性,表明副干酪乳杆菌PC-01通过调节肠道菌群结构与氨基酸代谢,改变机体的氨基酸环境,进而对食物过敏机体产生积极的免疫调节作;通过对小鼠组织中mTOR信号通路相关基因表达和小肠免疫荧光分析发现,副干酪乳杆菌PC-01抑制小鼠脾脏与小肠组织中氨基酸(Ile,Leu)对SESN2以及mTOR信号通路下游基因Cyclin D1表达的调节作用,同时抑制食物过敏小鼠肠上皮细胞中mTOR信号通路的激活,表明PC-01通过调节肠道菌群氨基酸代谢功能,调节机体的氨基酸稳态,干扰SESN2对氨基酸(Ile、Leu)免疫活性的调控作用,并抑制氨基酸对肠道上皮细胞mTOR信号通路的激活,缓解氨基酸的促食物过敏反应,进而起到缓解或预防食物过敏的效果。