人外周血树突状细胞培养及其介导的抗肾透明细胞癌786-0细胞株体外实验研究

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目的:通过研究人外周血单核细胞来源的树突状细胞(Dendritic Cells,DCs)体外诱导扩增方法、生物学特征及DCs介导的特异性CTL体外抗肾癌786-0细胞的作用,为DCs疫苗应用于治疗中晚期肾癌的临床提供理论依据。方法:1.人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定从正常人体外周血分离出单核细胞,贴壁后应用细胞因子诱导培养,比较不同细胞因子对DCs扩增的作用,筛选出最佳培养方法;在rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合作用下培养7-10天,通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、混合淋巴细胞反应以及DCs培养过程中上清液rhIL-12测定,从形态学、生物学活性等方面鉴定所获得的细胞是典型、有生物学活力的树突状细胞。2.肾癌786-0细胞株的体外培养选用具有典型人肾癌特征的肾透明细胞癌细胞株786-0细胞进行培养,了解其生物学特性,测定细胞倍增时间、生长曲线以确定实验对象。3.负载抗原的树突状细胞介导的T淋巴细胞增殖效应制备肾癌786-0细胞株冻融裂解性抗原并测定其蛋白浓度;应用上述方法扩增收
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