菊芋多糖的提取、分离、纯化及分析研究

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菊芋多糖是由D-果糖通过β(1→2)糖苷键连接而成的,是一种非常安全的食品添加剂,对人体有显著的保健功能,菊芋对于生长环境要求低,近年来,菊芋受到国内外的人士的重视,必有好的应用前景。本论文使用菊芋块茎为原料,对菊芋多糖的提取、纯化、脱色、纯度鉴定、理化性质以及结构和组成进行了分析。其中对比了热水浸提法和超声提取法提取多糖的效果,然后分别采用石灰乳法、Sevage法、三氯乙酸法、盐酸法对菊芋粗多糖中的蛋白质、果胶等大分子杂质进行去除。运用活性炭进行脱色,确定了最佳条件,最后得到的精制菊芋多糖样品,应用紫外-可见分光光度计进行纯度鉴定,红外光谱仪初步分析结构,X-射线粉末衍射仪、扫描电镜、透射电镜观察形态特征,高效液相(HPLC)色谱仪对其进行定性、定量检测。实验结果如下:(1)分别利用热水浸提法和超声浸提法提取菊芋多糖。先通过单因素实验,择优各个条件,再运用正交试验来探究。其中热水浸提法研究获得的最佳工艺条件:提取时间60min、温度90oC、固液比1:18、料醇比1:3、提取次数3次。超声浸提法最佳工艺条件:提取时间40min、固液比1:20、温度80oC。(2)采用石灰乳法、Sevag法、三氯乙酸法、盐酸法对提取的菊糖进行脱蛋白,其中通过石灰乳法的单因素实验,结果显示,石灰乳法的蛋白质清除率最高。(3)采用活性炭(粉末)对纯化后的菊芋多糖进行脱色处理,首先通过单因素实验,择优各个条件,再使用正交试验来确定出最佳脱色条件:活性炭用量2%,脱色时间20min,脱色温度60oC,脱色率可以达到88.9%。(4)根据苯酚-硫酸法测量出精制菊芋多糖的总糖含量为:98.4%,还原糖含量3.2%,多糖的含量=总糖含量-还原糖含量,所以多糖的含量为:95.2%。根据考马斯亮蓝法显色法测量此菊糖的蛋白质含量紧为:0.26%。(5)通过紫外扫描判断出纯化后的多糖样品中不含蛋白质和核酸等杂质,红外检测初步分析了多糖的结构,包括多糖中各种显著的官能团。通过扫描电镜和电子显微镜可以看出,菊粉的外貌特征。(6)应用HPLC测定菊糖的单糖组成,首先我们将菊芋多糖用酸水解成单糖,然后再进入HPLC进行检测,结果表明,菊芋多糖是由葡萄糖和D-果糖两种单糖组成,D-果糖先出峰,葡萄糖后出峰,其中D-果糖的含量较葡萄糖多。
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