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转“全鱼”生长激素(GH)基因能明显促进鲤鱼胸腺发育,有效延缓胸腺退化。应用抑制性差减杂交技术构建了4月龄F3代转全鱼生长激素(GH)基因鲤鱼(CyprinuscarpioL.)胸腺发育差减cDNA文库。并随机挑取了200多个PCR检测呈阳性的克隆进行了斑点杂交,选取斑点杂交阳性的克隆进行测序,挑选6个斑点杂交阳性克隆进行了RT-PCR验证和7个斑点杂交阳性克隆进行了虚拟Northern杂交,这7个基因全部呈差异表达阳性。
通过RACE快速末端扩增得到了差异表达基因CD8p、CD4、TCRγ、CD3γ/δ4个T细胞标志基因的cDNA全序列。RT-PCR检测这些已经得到全长cDNA的基因,研究它们在成年鲤鱼中的组织分布,在被检测的几种免疫相关的组织中这几个基因均检测到转录产物,其中胸腺、鳃、和小肠表达较强。
通过对斑马鱼早期胚胎发育阶段的观察,发现在注射了330pg的GHmRNA后,斑马鱼胸腺发育标志基因Ragl的表达获得显著增强,表明和证实了GH对胸腺早期发育的促进作用。
运用斑马鱼CD8α和CD8β的反义RNA探针,对受精后第4天和第5天的斑马鱼幼苗进行整体原位杂交观察,检测到其在肠泡和脊索部位的表达,且该部位的表达可为免疫抑制剂地塞米松所抑制,并为GH所增强,表明了CD8+细胞在早期斑马鱼发育阶段形成于肠道和脊索的特性。
构建了从500bp到11kb不同长度的斑马鱼CD8β5基因组片段驱动EGFP表达的转基因报告斑马鱼,仅在脊索部位有明显的荧光表达。