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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起,在全球养猪生产中最重要的烈性传染病之一。该病的主要特征是生产母猪的繁殖障碍表现为流产、死胎、木乃伊胎,以及仔猪呼吸系统疾病。因PRRSV的抗原具有高突变性、以及病毒的持续感染等特征,至今仍没有开发出完全有效的商业疫苗,难以对该病进行有效的预防和治疗。因此,宿主本身对抗PRRSV的研究变得至关重要,既能深入剖析PRRSV感染后的致病机制,又为进一步的疫苗开发提供理论指导。microRNAs(miRNAs)是一类可以在转录后水平调控基因表达的非编码小RNA,目前大量的研究表明,miRNAs能够靶向病毒基因组或宿主基因来影响病毒的复制。我们前期的研究结果表明,猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的宿主源microRNA miR-10a能够显著抑制PRRSV在PAMs中的复制,并证明了miR-10a是通过特异性抑制其下游靶基因SRP14的翻译来抑制PRRSV复制的。但miR-10a的转录调控机制仍不清楚,为了阐明这一机制,本研究在前期实验结果的基础上,预测并鉴定了miR-10a的增强型启动子区域,并进行软件预测能够结合在这一区域内的转录调控元件,进一步筛选出对miR-10a起调控作用的相关转录因子及其在PRRSV感染过程中的功能研究。得到了以下结果:1.猪源miR-10a启动子区的鉴定及增强型启动子区的筛选我们利用生物信息学软件结合体外实验,预测并构建了猪源miR-10a的启动子区8500bp的荧光素酶报告重组质粒,并由荧光素酶活性检测结果证实该区域具有启动子活性;接着我们在此区域内进一步梯度截短,以获得miR-10a的增强型启动子区。经过三轮的梯度截短结合荧光素酶检测实验,我们将猪源miR-10a的增强型启动子区确定在pre-miR-10a上游(-6.85k/-6.8k)50bp区间。2.转录因子的预测分析及鉴定我们根据筛选到的miR-10a增强型启动子区,利用生物信息学软件预测分析能够结合在此区域内的相关转录调控元件,并根据转录因子结合位点突变的荧光素酶活性检测实验结果,证实了miR-10a增强型启动子区的NF-κB结合位点能够调控miR-10a的转录;接着我们利用NF-κB的特异性核转运抑制剂BAY11-7082处理PAMs,qRT-PCR检测miR-10a及其下游靶基因的mRNA水平,发现NF-κB的确能够负调控miR-10a的转录;最后我们使用BAY11-7082处理PAMs后再感染PRRSV GD-HD毒株来研究NF-κB在PRRSV感染过程中发挥的作用,qRT-PCR和Western Blot的结果表明,抑制NF-κB的核转运后,miR-10a的mRNA水平显著上调,其靶基因SRP14的mRNA水平显著下调,最终对PRRSV的复制具有显著抑制作用。综上所述,NF-κB能够负调控miR-10a的转录继而在PRRSV感染中发挥促进病毒复制的作用,这为PRRSV的防治提供了新的思路。