Lipofection介导bcl-xL反义寡核苷酸诱导鼻咽癌细胞株凋亡的研究

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目的:为了开发抗鼻咽癌的基因治疗药物,本研究首次以bcl-xL基因为靶点,人工合成bcl-xL反义寡核苷酸(ASODN)利用基因转染方法将其导入细胞,观察ASODN处理后细胞的一系列变化。   方法:以鼻咽癌高分化株CNE-1及鼻咽癌低分化株CNE-2Z细胞为体外模型,以Lip作为基因转染的载体将ASODN导入细胞,应用MTT、透射电镜、荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、RT-PCR、Westernblot、CPP32活性测定等方法,首次观察了ASODN在Lip介导下,对鼻咽癌CNE-1与CNE-2Z两种细胞株增殖的影响;ASODN诱导细胞凋亡以及对Lip在基因转染中的作用进行了观察;进一步对ASODN的作用机理进行了初步探讨。同时与序列对照反义寡核苷酸(SCODN)组、Lip组及未处理组等作了相应的比较。   结论:1.细胞在去血清培养液中生长良好、倍增时间基本不变ASODN、SCODN、Lip在本实验条件下对细胞的毒性作用不显著。2.Lip可促进ASODN向细胞内转运。3.Lip介导ASODN可呈现时间与剂量依赖性增加鼻咽癌CNE-1细胞株与CNE-2Z细胞株的增殖抑制。4.Lip介导ASODN可呈现时间与剂量依赖性抑制bcl-xL基因mRNA转录,减少了bcl-xL基因mRNA向蛋白质的翻译,导致Bcl-xL蛋白表达下调;bcl-xL的下调启动了caspase家族级联活化,表现为CPP32酶原裂解增多,CPP32活性增强;并且在级联活化过程中有新的酶原合成,表现为cpp32mRNA表达增加,导致△ψm下降以及促使CytC通过线粒体外膜释放入胞浆,诱导细胞凋亡。  
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