富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)的克隆、表达、纯化、生化性质及初步结晶研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:poppytao
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LRRK2基因的突变是导致帕金森氏综合症的关键致病因素,其编码的LRRK2蛋白(280kD)富含多个功能性结构域,包括位于N端的ankyrin结构域。本课题通过结构生物学手段完成LRRK2基因功能片断的克隆及表达,建立了可增强蛋白可溶性的分子进化系统,利用原核系统纯化得到LRRK2 N端结构域蛋白N1(aa:12-320)和N2(aa:12-860),并通过质谱鉴定纯化得到的蛋白确为LRRK2。分子筛标定实验表明N1有单体、二体和三体三种形式(单体和二体间呈动态互变),该结果被cross-linking实验进一步证明;而N2为多聚体。圆二色谱实验表明LRRK2N端结构域拥有α helixes及β sheets等完善的二级结构,并初步得到了LRRK2 N端蛋白的晶体。我们推测LRRK2N端结构域的多聚化现象和其功能的发挥有一定的关系。
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