【摘 要】
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原发性肝细胞肝癌（HCC）是世界范围内发病率和死亡率都很高的恶性肿瘤之一,与世界其他国家尤其是西方国家相比,我国HCC死亡率居各国之首。线粒体作为抗癌药物的分子靶标之一备受关注,且越来越多的文献证明线粒体亲环蛋白D（CypD）与肿瘤的发生发展关系密切。作为中药大黄的主要活性成分,大黄素和大黄酚具有多种生物活性,包括抗肿瘤活性。但是,对于它们抗肿瘤的机制和体内的分子靶标还缺乏深入研究。在本论文中,我
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原发性肝细胞肝癌（HCC）是世界范围内发病率和死亡率都很高的恶性肿瘤之一,与世界其他国家尤其是西方国家相比,我国HCC死亡率居各国之首。线粒体作为抗癌药物的分子靶标之一备受关注,且越来越多的文献证明线粒体亲环蛋白D（CypD）与肿瘤的发生发展关系密切。作为中药大黄的主要活性成分,大黄素和大黄酚具有多种生物活性,包括抗肿瘤活性。但是,对于它们抗肿瘤的机制和体内的分子靶标还缺乏深入研究。在本论文中,我们研究发现大黄素和大黄酚可以进入肝癌细胞线粒体,并通过直接上调CypD蛋白表达的方式,杀死癌细胞。研究内容如下:（1）细胞分布和诱导线粒体机能损伤:大黄素和大黄酚具有绿色荧光,因此通过激光共聚焦显微镜确定它们主要分布在细胞的线粒体内;进而,它们可以降低线粒体膜电位,耗竭ATP和诱导活性氧ROS过量生成。（2）杀死肿瘤细胞的方式:通过Hoechst33342/PI双染、流式细胞术检测,发现大黄素引起肝癌细胞HepG2凋亡,而大黄酚诱导细胞坏死。并且,大黄素促使细胞色素C从线粒体释放入胞浆中。另一方面,采用CypD的抑制剂环孢菌素A（CsA）可以抑制它们杀死癌细胞,说明CypD参与了细胞死亡的过程。其次,对于线粒体DNA（mtDNA）缺失的HepG2（ρο）细胞,大黄酚不能诱导细胞坏死,说明mtDNA参与了大黄酚诱导的坏死。（3）与CypD的相互作用:通过Western blot检测蛋白表达水平,发现它们上调线粒体亲环蛋白D表达;加入抗氧化剂NAC、生长因子EGF（ERK激活剂）后线粒体亲环蛋白D表达减少,说明ROS和ERK参与到了 CypD的表达;分子对接实验发现,大黄素和亲环蛋白D之间存在3个氢键,结合能为-29.12 kal/mol;大黄酚和亲环蛋白D之间存在2个氢键,结合能为-11.94 kal/mol。
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