目的:创伤性脑损伤（TBI）是一种严重的神经系统创伤,可直接导致神经元坏死、血脑屏障（BBB）结构严重损伤,并继发引起脑水肿等一系列致命性损害。目前,对于创伤性脑损伤后保护血脑屏障的治疗效果难以令人满意,因此,寻找新的治疗靶点迫在眉睫。Rap1是一种与Ras蛋白具有高度同源性的小GTPase蛋白,以小GTP酶充当分子开关,在活性GTP结合状态和无活性GDP结合状态之间循环。此前的研究发现,Rap1信号通路主要介导参与了细胞黏附、细胞连接的形成以及内皮屏障的保护等方面,Afadin作为Rap1下游的效应子在细胞之间的连接中发挥着重要的作用。因此,我们把研究方向集中到了Rap1信号通路对创伤性颅脑损伤后血脑屏障影响的研究。本实验欲探索激活Rap1信号通路对创伤性脑损伤后血脑屏障的影响及其作用机制,了解Rap1激活后是否能改善受损血脑屏障的通透性并减轻脑水肿,从而作为一个新的靶点改善创伤性脑损伤后血脑屏障通透性。方法:1.造模:选择成年C57BL6雄性小鼠,麻醉后使用气压型颅脑创伤仪制造创伤性脑损伤小鼠模型;2.将创伤部位脑组织提取蛋白后,采用Western blotting技术检测TBI后不同时间点Afadin、血脑屏障相关连接蛋白与正常小鼠脑组织的表达差异;3.使用Evans blue实验检测不同时间点各组小鼠血脑屏障通透性改变情况;4.使用干湿比重法检测不同时间点各组小鼠脑组织含水量情况;5.使用GTP-Rap1 pull down实验检测各组小鼠体内Rap1活化情况;6.使用免疫荧光技术检测各组小鼠血脑屏障相关连接蛋白;7.敲减Afadin后,使用Western blotting技术、免疫荧光技术检测血脑屏障相关连接蛋白表达情况。结果:1.Western blotting结果显示:TBI后实验组和创伤组小鼠血脑屏障相关连接蛋白:Afadin、ZO-1、claudin-5等表达量较对照组均减少（P<0.05）,并且在第三天时表达量最低;但是实验组蛋白表达量比创伤组多（P<0.05）;2.Evans blue实验结果显示:实验组及创伤组小鼠脑组织EB含量明显高于对照组（P<0.01）,实验组小鼠脑组织EB含量虽高于对照组,但较创伤组明显减少（P<0.01）。3.干湿比重法结果显示:TBI后小鼠的脑组织含水量均较对照组小鼠增加明显（P<0.01）,这表明TBI后小鼠脑组织水肿明显,但是实验组小鼠脑组织水肿较对照组轻（P<0.01）;4.GTP-Rap1 pull down实验结果显示:实验组小鼠脑组织内活化的Rap1（GTP-Rap1）表达量比创伤组多（P<0.01）。5.免疫荧光检测结果显示:TBI后小鼠血脑屏障受损明显,相关连接蛋白表达量明显低于对照组（P<0.05）,但是实验组连接蛋白表达量高于创伤组（P<0.05）。6.敲减Afadin后,使用Western blotting技术、免疫荧光技术检测发现血脑屏障相关连接蛋白表达量明显减少（P<0.01）,创伤组及实验组的蛋白表达量未见明显差异(（P>0.05）。结论:Rap1信号通路对于创伤性脑损伤后血脑屏障保护具有重要作用;Rap1活化后通过下游的Afadin募集内皮细胞相关连接蛋白,使TBI后BBB连接蛋白表达量增加,从而降低血脑屏障通透性。敲减Afadin蛋白后将阻断Rap1活化后对血脑屏障的保护作用并使血脑屏障通透性升高。