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研究背景及目的：DNA甲基化是肿瘤早期频发事件,高甲基化可导致基因沉默,从而参与肿瘤的发生、发展。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是血液系统恶性肿瘤,目前临床治疗已进入分子靶向治疗水平,但对于分期评价、预后监测却仍停留在影像学、细胞形态学水平,与治疗相比较为滞后。于力教授等用RLGS方法筛查出ZO-1基因可能与血液系统恶性疾病相关,它的启动子区异常甲基化起到重要作用。ZO-1是一种紧密连接蛋白,它在维持正常胞旁屏障通透性、细胞信号转导、基因转录及调节细胞增殖分化中发挥着巨大作用,与肿瘤的分化和浸润密切相关。前期研究证实其在人白血病细胞系HL60中、自然杀伤细胞系NK92中呈现高甲基化状态且失表达,这提示它可能是一个血液系统恶性肿瘤相关的抑癌基因。本文旨在通过研究ZO-1基因在非霍奇金淋巴瘤石蜡标本、骨髓标本中甲基化状态及其与分期、分型、缓解间关系,进一步探讨其作为通用性基因标记、指导临床治疗的意义。实验共分两部分。第一部分：方法：采用甲基化特异性PCR (MS-PCR)方法对29例非霍奇金淋巴瘤及10例反应性增生淋巴结石蜡包埋标本ZO-1基因启动子区甲基化状况进行检测。结果：(1)29例NHL中17例出现甲基化条带,2例出现完全非甲基化条带,10例未出现扩增产物,甲基化阳性率89.4%(17／19),阳性率明显高于反应性增生淋巴结(0／7)(p<0.05)。(2)4例T细胞型NHL,甲基化阳性4例,阳性率100%,15例B细胞型NHL,甲基化阳性13例,阳性率86.6%,二者差别无统计学意义(P>0.05)。T细胞型、B细胞型NHL分别与反应性增生淋巴结比较有统计学差异。(3)共检测标本39例,其中2年以上标本16例,获得检测结果的7例,检出率43.7%；1-2年标本7例,获得检测结果3例,检出率42.9%；1年以下标本16例,全部获得检测结果,2年以上标本与1-2年间标本间检出率无显著差别(P>0.05),上述两组标本与1年以内标本检出率比较均有显著性差异(P<0.05)。结论：1、Z0-1基因甲基化在NHL组织中发生率显著增高,在各亚型间差别不大,可以作为NHL辅助诊断的通用性基因标记；2、随着标本制备时间延长检出率下降,使用较为新鲜的组织,可增加检测的敏感性、降低假阴性率。第二部分方法：采用MS-PCR方法对45例次NHL骨髓、5例特发性血小板减少性紫癜(ITP)、5例正常人骨髓标本ZO-1基因启动子区甲基化状况进行检测。结果：(1)骨髓ZO-1基因启动子区甲基化状况：39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中ZO-1基因甲基化阳性21例(阳性率53.85%),而ITP组及正常人组甲基化阳性率均为0%(0／5),NHL患者与ITP及正常人间有统计学差异(P<0.05)；(2)NHL初治、复发组甲基化阳性率57.14%(16／28),未完全缓解组甲基化阳性率45.45%(5／11),分别与CR组0%(0／6)比较均有统计学差异(P<0.05),而初治、复发组与未完全缓解组无统计学差异。(3)T、B细胞型NHL间甲基化状况无统计学差异(P>0.05),而B细胞各亚型以滤泡型淋巴细胞甲基化阳性率高,其次为弥漫大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤,最后是套细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤。(4)在39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中,28例Ⅲ、Ⅳ期的患者ZO-1基因甲基化阳性18例,阳性率64.29%,11例Ⅰ、Ⅱ期患者ZO-1基因甲基化阳性3例,阳性率27.27%,二者之间差异有统计学意义(p<0.05)。(5)动态监测部分患者甲基化与治疗效果关系显示3例Ⅳ期病人初治时甲基化阳性,完全缓解(CR)后甲基化阴性,显示出ZO-1基因随治疗缓解后的动态变化。结论：ZO-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解相关,有望作为判断非霍奇金淋巴瘤进展和评价预后的辅助指标、指导临床治疗。综上,ZO-1基因启动子区甲基化在疾病的不同时期甲基化状况不同,病理类型间差别不大,作为通用性基因标记有望为分子水平的诊断、评价分期、指导治疗提供新的依据。