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目的:本研究采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)患者肾脏手术取材标本通过体外培养、鉴定人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts，hRIFs)并观察中药丹参的主要成分——丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone Ⅱ-A sulfonate，DS-201)对人肾间质成纤维细胞体外增殖周期的影响以及P16、P27表达的影响，从分子水平揭示丹参酮ⅡA磺酸钠影响hRIFs体外增殖的作用机制，阐明其在延缓肾间质纤维化过程中作用的具体环节，为中药丹参治疗肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)提供理论和实验依据。方法:1.单侧输尿管梗阻(UU0)患者手术取材标本，采用组织块培养法体外培养人肾间质成纤维细胞。用倒置相差显微镜观察细胞形态，免疫细胞化学(immunocytochemistery，ICC)技术和染色体核型分析对各代细胞进行鉴定。2.取第3～5代对数生长期的hRIFs进行实验。①采用免疫细胞化学技术和图像分析技术检测0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS-201孵育hRIFs 72小时后P16、P27的表达，并检测阳性率及阳性细胞平均光密度值；②流式细胞技术检测0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS-201对hRIFs体外增殖周期的影响。结果:1.原代培养5～7天后，组织块周围开始长出细胞，以立方和长梭形细胞为主，12～14天后细胞可以铺满瓶底；第2～5代细胞形态较为均一，多呈长梭形，细胞呈栅栏状、鱼群状排列，核椭圆形，可见1～2个核仁，胞浆丰富，细胞周围可见长短不一的细胞突起。第2代细胞免疫细胞化学检测波形蛋白(vimentin)强阳性，角蛋白(keratin)散在个别细胞阳性，第3～5代细胞除vimentin强阳性外，结蛋白(desmin)和keratin均呈阴性表达，显示细胞经多次传代后已达到纯化的目的；对2～5代细胞进行染色体核型分析鉴定，结果显示体外培养第2～5代细胞具有正常人体二倍体细胞的核型，以上结果说明第3～5代细胞为纯化的正常人体二倍体核型的成纤维细胞。2.①与对照组相比，各DS-201组hRIFs随着用药浓度的增高，细胞染色强度增强，细胞变得疏松，hRIFs形态变化较大，由均一的梭形变成椭圆形甚至圆形；各实验组阳性率及平均光密度值显著增加，高于对照组(P<0.05)；实验组间，随着DS-201浓度的增加，P16、P27的表达均有显著差异，平均光密度值显著增加(P<0.05)。②在0～2.0mg/ml浓度范围内，各实验组随DS-201浓度的增加，G0/G1期细胞比逐渐增多，而S期细胞比逐渐下降，各实验组与对照组之间差异均有显著意义(P<0.05)。结论:1.体外成功培养hRIFs，第3～5代细胞可作为实验供体。2.DS-201对hRIFs体外增殖周期具有抑制作用，可能是其抑制RIF的机制之一。3.DS-201可能通过促进G1期关键的细胞周期素依赖激酶抑制剂P16、P27表达，阻滞细胞通过G1/S关卡，延长细胞周期发挥抑制RIF作用的。4.DS-201因水溶性增强而大大提高了丹参酮Ⅱ A的药物疗效，有望成为临床上用于治疗晚期肾脏病人肾间质纤维化的药物。