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[目 的]使用生物信息学方法对Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中高通量测序的微阵列数据进行了分析,从有淋巴结转移(N+)与无淋巴结转移(NO)的宫颈癌组织样本间差异表达的基因(DEGs)中筛选出参与膜囊泡运输的相关基因分泌型载体膜蛋白(secretory carrier membrane protein 1,SCAMP1),并进一步通过在线工具预测,得到可能调控SCAMP1的miRNA-miR-194-5p。基于以上的分析结果,我们进一步在宫颈癌细胞系、N+和NO的宫颈癌组织样本中检测miR-194-5p和SCAMP1的表达水平,并拟进一步在宫颈癌细胞系中研究miR-194-5p和SCAMP1分别对细胞迁移和侵袭能力的影响;最后,拟在宫颈癌细胞系中寻找miR-194-5p靶向调控SCAMP1基因的直接证据。[方 法]1、运用生物信息学的方法对Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中高通量测序的微阵列数据进行了分析,获得宫颈癌组织N+和NO之间表达差异基因(DEGs)和差异微小RNA(DEMs),从DEGs中筛选出参与膜囊泡运输相关的基因SCAMP1,再通过在线工具的预测,得到可能调控SCAMP1的miRNA(miR-194-5p);2、收集2019年2月-2019年8月在云南省肿瘤医院接受初始手术治疗的宫颈癌术后组织样本;3、分别对4例N+和4例NO组织通过高通量测序的方法检测全转录组的表达差异情况,再次验证从GEO数据库得到的miR-194-5p和SCAMP1分别在N+与NO之间的表达差异结果;4、利用RT-qPCR方法分别在多种人宫颈癌细胞系(Hela、C-33A、Ca Ski、SiHa)和正常宫颈上皮细胞系(HcerEpic),宫颈癌组织和癌旁组织(12例宫颈癌组织及对应的癌旁组织),以及N+和NO组织(各8例组织样本)中检测SCAMP1 mRNA和miR-194-5p的表达差异情况;5、选取N+与NO的宫颈癌组织各6例,提取蛋白,使用Western blotting(WB)检测SCAMP1蛋白的表达情况;6、选取N+与NO的宫颈癌组织各6例,使用免疫组化染色法(IHC)检测SCAMP1在N+和NO癌组织中的表达情况。[结 果]1、分析GEO数据库中的GSE7410和GSE102969微阵列数据集可知,与NO组织相比,SCAMP1 在 N+的组织中表达上调,logFC=0.26,(p<0.05);而 miR-194-5p在 N+的组织中表达下调,logFC=-2.24,(p=0.047);利用 TargetScan 和 starBase数据库预测得到31个可能靶向调控SCAMP1的miRNA,其中miR-194-5p是保守程度高,最有可能直接调控SCAMP1的上游miRNA;2、共收集宫颈癌术后组织样本66例,其中N+组织样本13例,NO组织样本53例;每例患者采集6管组织样本;3、测序结果显示,N+和NO之间有59个显著差异表达的基因,上调24个,下调35个(|log2FC|>1,FDR<0.05);有103个显著差异表达的miRNA,上调62个,下调41个(|log2FC|>2,P<0.05);测序结果显示,SCAMP1在N+和NO之间表达无差异(log2(FC)=-0.41,PDR=0.98);miR-194-5p的表达差异也不显著(log2(FC)=1.4,PDR=0.56);4、在宫颈癌细胞系水平通过qRT-PCR检测发现,宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞相比,miR-194-5p在C-33A、Ca-Ski和SiHa细胞中的表达高于HcerEpic细胞(p<0.05);同样SCAMP1在C-33A和SiHa细胞中的表达上调(p<0.05);在组织水平,qRT-PCR检测结果发现,相对于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-194-5p(p=0.17)和SCAMP1(p=0.15)的表达都无差异;但相对于NO组织,N+组织中SCAMP1的表达显著上调(p=0.015),而miR-194-5p在N+和NO两者之间无差异(P=0.31);5、WB结果显示:N+和NO相比,SCAMP1的蛋白表达无明显差异(p=0.11)。6、免疫组化分别检测6例NO和6例N+宫颈癌组织中SCAMP1的表达情况发现,SCAMP1在N+和NO组织中均有表达,且两者SCAMP1的染色强度及比例差异不显著。[结 论]1、对数据集GSE7410分析显示,相对于NO组织,SCAMP1在N+组织中表达显著上调,miR-194-5p在N+组织表达下调,但测序结果显示miR-194-5p和SCAMP1在NO和N+组织之间无表达差异。2、相对于正常宫颈上皮HcerEpic细胞,miR-194-5p在C-33A、Ca-Ski和SiHa细胞中高表达,SCAMP1在宫颈癌C-33A和SiHa细胞中表达显著上调。3、在RNA水平,miR-194-5p和SCAMP1在宫颈癌组织和癌旁组织中均无表达差异;但与NO组织相比,SCAMP1在N+组织中表达显著上调,而miR-194-5p在N+和NO两者之间无差异。在蛋白质水平,SCAMP1在N+和NO组织中的表达无显著差异。4、总之,miR-194-5p和SCAMP1在宫颈癌细胞和组织中的表达结果不一致,其两者可能对宫颈癌的淋巴结转移无影响。