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本研究将人ccr5基因转染CHO细胞，并采用噬菌体随机12肽库对稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5细胞)进行亲和筛选，以期获得与CCR5具有特异性亲和作用并能抗HIV-1感染的小分子多肽。首先，将人ccr5基因与真核表达载体pBBS242连接，构建成重组质粒pBBS242-ccr5并转染CHO细胞。经潮霉素B(300mg/L)进行选择筛选，以获得稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5细胞)，并采用流式细胞技术对CHO/CCR5细胞进行鉴定。然后采用噬菌体随机12肽库对CHO/CCR5细胞进行亲和筛选，共进行四轮吸附—洗脱—扩增的筛选过程。随机挑取四轮筛选后的单个噬菌体克隆进行ELISA分析，30个克隆全部为阳性。测序结果表明，30个噬菌体克隆含有9种不同外源插入氨基酸序列。其中17个克隆含有相同的外源插入片段，其编码的氨基酸序列为AFDWTFVPSLIL。氨基酸序列比对显示，AFDWTFVPSLIL与趋化因子或已知的蛋白质不具有一级结构上的同源性。9种不同插入序列的噬菌体被用于进一步的结合活性研究，结果显示含AFDWTFVPSLIL外源肽的噬菌体对CHO/CCR5细胞的结合效率大约是对CHO细胞结合效率的1000倍；或者是其它8个噬菌体对CHO/CCR5细胞结合效率的20～60倍。同时，含AFDWTFVPSLIL外源肽的噬菌体对RANTES与CHO/CCR5细胞的结合具有明显的抑制作用，其抑制率可达70％左右；而其它噬菌体则只有很小的抑制作用。此外，含AFDWTFVPSLIL外源肽的噬菌体能明显抑制2D7与CHO/CCR5细胞的结合，而其它8个噬菌体则没有这种抑制作用。说明含AFDWTFVPSLIL外源肽的噬菌体具有最高的与CCR5特异性结合活性。为了证明噬菌体中插入的外源肽在其中所起的作用，合成了多肽AFDWTFVPSLIL，并进一步分析其功能活性。