我国部分地区嗜角蛋白适冷真菌资源调查及其产酶条件优化

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角蛋白是一种硬性蛋白,它广泛存在于动物的皮肤及皮肤的衍生物中,由于角蛋白的化学结构很稳定,因具有独特的分子结构而难以被人类以及生物自身利用,一般条件下不溶解,也很难被一般的蛋白酶所水解。故随意抛弃不仅会造成资源的浪费,也会导致环境污染。利用微生物降解角蛋白是一种很好的办法,既能改善环境,还能利用角蛋白中的营养成分。角蛋白及角蛋白酶在皮革、化妆品、洗涤剂用酶脱毛,和角蛋白纤维的生物聚合物等领域有较高的利用价值及广阔的发展前景。本文对我国部分省市的嗜角蛋白适冷真菌资源进行了广泛调查和系统研究,其研究结果不仅丰富我国的真菌资源库,也为生物技术产业提供宝贵的菌种资源,其研究工作总结如下:1、对我国8个省市的嗜角蛋白适冷真菌资源进行调查,从530份土样中经分离、纯化和初步鉴定获得地丝霉属真菌3株,小孢属10株,金孢属7株,赛多孢属2株。目前经研究鉴定发现新种6个。2、通过羽毛粉培养基进行初筛,以羽毛做为唯一的碳、氮源,获得嗜角蛋白适冷菌株共61株;采用羽毛降解效率作为复筛,筛选出一株具有较高角蛋白酶生产能力的G79菌株。并进一步对其生理生化特性和分子系统学等综合研究后,鉴定其属于赛多孢属的一个新种。3、在所试条件下,补充不同的C源、N源、S源、无机离子、接种量、羽毛粉及初始PH进行单因子实验,结果表明分别是乳糖、酵母膏、硫酸钠、硫酸锌、接种量在5%、羽毛含量在20g/L及PH为9时对产酶的促进作用最大。4、经Plackett-Burman试验、爬坡试验、Box-Behnken试验确立了模型的回归方程:Y=5384-131.25X2+292.5X1+256.25X5-2.5X1X2-195X2X5+262.5X1X5-894.5X2~2-427X1~2-394.5X5~2分析此模型可知存在最大值点,可得当X1=-0.031、X2=0.318、X5=0.244;即接种量为59.69(m L/L),羽毛含量为20.64(g/L),初始PH值为9.24时,发酵条件在实验范围之内时能够获得的最大酶活预期值为5497.99U/L。优化后获得的最大酶活,比基础培养基发酵时获得的酶活600U/L高出大约9倍。
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