猪H2A.Z、DAZL基因分离鉴定及遗传效应分析

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根据基因生理生化功能、猪繁殖性状QTL定位结果和猪-人比较图谱,选取H2A.Z基因和DAZL基因作为影响猪繁殖性状的候选基因。应用比较基因组学和生物信息学等方法进行候选基因的分离鉴定;采用RT-PCR进行部分基因的组织表达研究;利用直接测序法对所分离片段进行多态性检测;以大白猪(322头,438窝)、中国瘦肉猪新品系DIV母猪(210头,409窝)和大梅F2资源家系青年母猪(105头)为试验材料,进行基因多态性与猪繁殖性状的关联分析。研究结果如下:1.H2A.Z基因:(1)获得猪H2A.Z基因932bp的cDNA序列,其中包括387bp的编码区序列,185bp的5’UTR序列和360bp的3’UTR序列;获得932bp的基因组序列,其中包括完整的intron2、3、4。(2)对所获得序列进行多态性检测,在第二内含子发现一个连续4bp的缺失:建立了第2内含子的PCR-Bsu15I-RFLP分型技术。(3)遗传标记与繁殖性状的关联分析结果表明:Bsu15I多态位点与初产DIV系猪的NBA(P<0.05)显著相关,基因加性效应显著(P<0.05);与大白猪的所有胎次的NBA(P<0.01)极显著相关,基因加性效应显著(P<0.05)。2.DAZL基因:(1)获得猪DAZL基因2805bp的cDNA序列,其中包括887bp的编码区序列和1917bp的3’UTR序列;获得DAZL基因的部分基因组序列,其中包括内含子2,3,4,5,6,7,8,9的序列。(2)对所获得序列进行SNP检测,建立了DAZL基因第7内含子385bp处的PCR-MspⅠ-RFLP分型技术和第九内含子167bp处的PCR-TaqⅠ-RFLP分型技术。(3)遗传标记与繁殖性状的关联分析结果表明:TaqⅠ多态位点与大白猪所有胎次产活仔数显著相关(P<0.05);与DIV猪的头胎产活仔数显著相关(P=0.06)。(4)构建了DAZL—PGEX—kg重组载体,并在大肠杆菌表达系统中进行了诱导表达;诱导表达的蛋白经过PAGE凝胶检测,结果表明:DAZL—PGEX—kg重组载体所表达的蛋白分子量与预测结果相一致。上述研究结果显示:H2A.Z基因Bsu15I;DAZL基因TaqⅠ多态位点可作为猪产仔数的分子遗传标记。对上述基因的分离、鉴定、多态性及表达调控研究有助于我们更深地了解基因的生物学功能,为揭示猪产仔数分子机理和标记辅助选择的实施提供理论依据。
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