苦参粗提物对柯萨奇B组3型病毒急性及持续性感染抑制作用的研究

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目的:柯萨奇病毒是人类重要的病原体,可引起心肌炎、心包炎等疾病,严重危害人类健康。抗柯萨奇病毒治疗可有效改善病毒性心肌炎临床症状,延缓病程,中药黄芪抗柯萨奇病毒疗效明确,本试验以黄芪作为阳性对照药物,探讨苦参粗提物对柯萨奇病毒急性及持续性感染的抑制效果及可能的作用机制。方法和结果:1.建立CVB3持续感染细胞模型:以10-4TCID50 CVB3感染ECV304细胞,建立CVB3持续感染细胞模型,观察持续感染细胞模型培养上清液对Vero细胞的CPE和RT-PCR法检测上清中的CVB3核酸。结果:持续感染模型细胞培养上清液可使Vero细胞产生明显CPE,并含有少量病毒核酸,表明CVB3持续感染细胞模型建立成功。2.以100TCID50 CVB3病毒液为感染浓度,苦参药液浓度为4mg/ml、2mg/ml和1mg/ml,按苦参对CVB3的作用方式分为三组:预防组、直接作用组和感染后给药组,进行苦参对CVB3急性感染抑制作用的研究,MTT法检测苦参对CVB3的抑制作用;用原位ELISA、细胞保护试验、RT-PCR和TNF-α检测,判断苦参对CVB3持续感染的抑制作用。结果:在药物对病毒的预防作用组中,苦参不能预防CVB3感染,CVB3对ECV304细胞CPE未明显减轻;在药物和病毒直接作用组及感染病毒后给药组中,ECV304细胞病变明显减轻,呈剂量依赖性,随苦参浓度的增高,药物对CVB3的抑制率增高;在苦参对CVB3持续感染作用组中,与模型对照组相比,苦参作用后培养上清液致Vero细胞病变明显减轻,CVB3核酸复制减少、TNF-α含量降低,原位ELISA显示细胞表面CVB3抗原表达减少。与阳性药物黄芪比较,两种药物作用效果相似,差异无统计学意义。结论:1.本研究重复本室已建方法再建CVB3持续感染细胞模型成功,为体外抗病毒研究提供可靠的工具;2.以黄芪为阳性对照药物,探讨苦参对CVB3感染的抑制作用,发现①苦参能有效抑制CVB3对ECV304细胞的急性感染,同时也能抑制持续感染细胞模型中的CVB3,②苦参抑制CVB3感染细胞的途径与黄芪相似,今后可以借鉴黄芪药效机制的研究思路,深入探讨苦参的详细作用机制。
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