论文部分内容阅读
胰岛的异常可能是2型糖尿病(T2DM)发病的中心环节,特别是胰岛β细胞功能障碍被认为在T2DM发病进程中发挥主要作用。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTPIB)是胰岛素信号通路和瘦素信号通路共同的负调控因子,被公认为胰岛素增敏剂潜在的分子靶点。通过抑制PTPIB可以改善胰岛素抵抗,继而起到保护胰岛β细胞的作用。近期研究指出,PTPIB敲除的小鼠胰岛β细胞量增加,葡萄糖刺激的胰岛素分泌量增加。据此,本研究旨在探讨PTPIB是否为保护胰岛β细胞的潜在的分子靶点。本研究采用尾静脉注射低剂量四氧嘧啶(alloxan)形成胰岛β细胞受损小鼠模型。以GSIS来评价动物胰岛β细胞的分泌功能;以病理切片中胰腺的胰岛数量和总面积评价胰岛细胞量;采用OGTT评价动物的糖代谢状态;用western blot方法检测胰腺组织相关蛋白的表达。分别用体外酶活性、细胞内酶活性、以及动物胰腺蛋白表达等方法评价样品对分子靶点PTPIB的作用。采用高脂饮食诱导的胰岛素抵抗肥胖DIO小鼠和自发性2型糖尿病KKAy小鼠模型,以血糖水平、葡萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验、ISWBI指数血清胰岛素水平、血总胆固醇、血甘油三酯等指标综合评价体外具有PTP1B抑制活性的合成化合物的抗代谢综合征作用。结果显示,化合物CX09040可明显改善胰岛β细胞受损模型小鼠的葡萄糖耐量低减;抑制胰腺PTP1B的表达和活性,上调胰岛素受体(IR)磷酸化水平,调控β细胞增殖相关因子Akt、FoxO1的磷酸化水平、增加PDX-1表达,从而增加胰岛细胞量及葡萄糖刺激的胰岛素分泌,发挥其保护胰岛β细胞作用。提示分子靶点PTP1B可能是保护胰岛β细胞的潜在作用靶点。中药提取物RP2014006具有较强的体外抑制PTP1B作用。对胰岛β细胞受损模型小鼠,中药提取物RP2014006具有明显改善葡萄糖耐量低减作用,增加胰岛细胞量、提高葡萄糖刺激的胰岛素分泌等胰岛β细胞保护作用。抑制分子靶点PTP1B,上调IR磷酸化水平,进而调控β细胞增殖相关因子Akt、FoxO1磷酸化和PDX-1表达,可能是其发挥胰岛β细胞保护作用的重要机制。体外对PTPIB有抑制活性的13种合成化合物中,CX14001和CX09072可明显改善机体葡萄糖耐量低减和胰岛素抵抗。总之,本研究结果显示,PTPIB可能是保护胰岛β细胞的分子靶点。具有PTP1B抑制活性的化合物CX09040、CX14001、CX09072和中药提取物RP2014006,显示了一定的抗糖尿病新药的开发前景。