随着刺参（Apostichopus japonicus）人工养殖业的快速发展，刺参病害日渐突出。微生物是刺参养殖池塘生态系统的重要组成部分，理化参数也与刺参的健康状况息息相关。因此，研究刺参养殖池塘中可培养细菌的周年变化规律及其与理化参数的关系，对刺参健康养殖具有重要意义。另外，快速定量检测环境中刺参病原菌的数量变化，也有助于对刺参疾病的发生进行预警，以便及时采取防治措施。本论文通过定期采样检测几类可培养细菌的数量和理化指标，研究了刺参养殖池塘水体和沉积物细菌的周年变化规律及其与理化环境因子的相关性，并建立了沉积环境中2种主要致病菌的快速检测方法，主要内容及结果如下：1.本研究于2012年4月至2013年4月，对山东省即墨刺参养殖池塘水体中4种可培养细菌（总异养菌、弧菌、硝化细菌、硫化细菌）、4项理化参数（温度、pH、盐度、溶解氧）和沉积环境中的6种可培养细菌（总异养菌、弧菌、硝化细菌、硝酸盐还原菌、硫化细菌、硫酸盐还原菌）、6项理化参数（温度、pH、氧化还原电位、硫化物、有机碳、总氮）的动态变化进行了监测；并分析了不同细菌类群之间及其与理化指标间的相关性。结果显示：水体中可培养总异养菌、弧菌的变化范围分别为：7.10×102cfu/mL~5.80×103cfu/mL和1.00×101cfu/mL~3.60×102cfu/mL，硝化细菌和硫化细菌的变化范围分别为：1.08×102cfu/mL~6.09×104cfu/mL和1.25×101cfu/mL~5.11×103cfu/mL，细菌数量的变化趋势与水体温度的变化趋势一致。沉积物中总异养菌、弧菌、硝化细菌、硝酸盐还原菌、硫化细菌和硫酸盐还原菌变化范围分别为：1.16×104cfu/g~9.62×104cfu/g，1.16×102cfu/g~9.01×103cfu/g，4.20×103cfu/g~7.48×104cfu/g，4.80×103cfu/g~5.85×104cfu/g，5.50×102cfu/g~4.45×103cfu/g和9.30×101cfu/g~8.38×102cfu/g。水体的pH、盐度、溶解氧的变化范围分别为：7.35~8.31，30.5~37.6，5.7~9.31mg/L。沉积物的pH、氧化还原电位、硫化物的变化范围分别为：7.10~7.61，-42.18~-65.06mV，36.9~89.7mg/kg。理化参数和微生物数量间进行相关性分析，结果显示：刺参养殖池塘水体温度与溶解氧呈极显著负相关，与水体中的总异养菌、弧菌、硝化细菌、硫化细菌均呈极显著正相关；水体pH与盐度呈显著正相关，水体溶解氧与总异养菌呈显著负相关。刺参养殖池塘沉积物的pH和氧化还原电位呈显著正相关、二者和硫化物含量均呈极显著负相关。硫化物含量与总异养菌、硫酸盐还原菌和硝化细菌均呈极显著正相关，与硫化细菌和硝酸盐还原菌呈显著负相关性，总氮含量和硝化细菌正相关性显著。各类细菌数量之间也存在一定的相关性：总异养菌与硝化细菌、硫酸盐还原菌之间、硝化细菌与硫酸盐还原菌均存在极显著正相关性，弧菌与总异养菌、硝化细菌之间存在正相关性，硝酸盐还原菌与硝化细菌之间、硫酸盐还原菌与硫化细菌之间存在负相关性。2.利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法。将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中，作为模拟沉积物样品。通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板，建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法，同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性。结果表明：采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA，以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物，并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线，可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法。该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中检测出气单胞菌属中不同种的细菌，检出效率可达103cfu/g。统计分析发现变异系数在0.21~0.80%，均小于5%，表明重复性良好。3.利用toxR基因的特异性引物，以梯度稀释的沉积物DNA为标准品构建标准曲线，建立了刺参养殖沉积环境中副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法，该方法具有较好的重复性，变异系数在0.31~0.92%，同样具有较好的特异性和准确性，检出效率高达102cfu/g。