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[目的]检测难治性根尖周炎根尖生物膜内的粪肠球菌,分析粪肠球菌的检出率与临床表现的关系。观察粪肠球菌单菌种生物膜的动态形成过程,研究生物膜形成过程中群体感应相关基因的表达情况,探讨其与生物膜形成的相关性。探究光动力疗法和二极管激光对体外培养的粪肠球菌生物膜的杀菌作用,并分析激光治疗的可行性。[方法]1.按纳入标准收集需要进行根尖外科手术的单根管患牙42颗,记录症状和体征,采集根尖生物膜样本,各样本均采用生化鉴定和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)两种方法检测粪肠球菌。统计学分析两种方法对粪肠球菌的检出率差异及其与患者症状体征之间的关系。2.粪肠球菌在盖玻片上培养形成6、12、24、48h单菌种生物膜模型,采用荧光技术标记活细菌和死细菌,激光共聚焦显微镜观察生物膜结构及细菌的分布；结晶紫染色酶标仪观测各时期形成生物膜的量。3.提取6、12、24、48h粪肠球菌生物膜细菌样本,通过Real-time QuantitativePCR(RT-qPCR)对粪肠球菌生物膜形成过程中群体感应相关基因fsrB、gelE和sprE的表达进行检测。4.建立体外培养24h的粪肠球菌生物膜模型48个,随机分为4组,光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)组和975nm二极管激光(diode laser,DL)作为实验组,2.5%的NaC1O和生理盐水(normal saline, NS)分别作为阳性和阴性对照组,标本处理后激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope, CLSM)观察各组生物膜中活菌、死菌的变化,平板细菌计数法检测生物膜内粪肠球菌的活力。[结果]1.生化鉴定和PCR检测难治性根尖周炎根尖生物膜内粪肠球菌的检出率分别为52.4%和71.4%,差异具有统计学意义(P<0.05)。PCR检测发现在疼痛组粪肠球菌的检出率高于无疼痛组(P<0.05)。2.粪肠球菌能在玻片表面黏附形成生物膜,生物膜内细菌分布不均匀,有死细菌和活细菌组成,24h内粪肠球菌生物膜的量随时间增加而增大,差异具有统计学意义(P<0.05)。24h-48h,生物膜的量略有增大,但差异无统计学意义；3.粪肠球菌生物膜群体感应相关基因fsrB、gelE和sprE均于生物膜形成6、12、24h时的表达量逐渐增多,于48h下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.与生理盐水组相比,NaC1O组、光动力疗法组和975nm二极管激光组处理后粪肠球菌的菌量显著下降,三组间两两比较差异无统计学意义(P<0.05)。[结论]1.PCR检测难治性根尖周炎根尖生物膜内粪肠球菌检出率较高,而且粪肠球菌的检出与疼痛存在相关性。2.粪肠球菌生物膜在24小时已成熟,群体感应相关基因fsrB、gelE和sprE在粪肠球菌生物膜初始形成发展期6-24h起着重要作用。3.光动力疗法和975nm二极管激光可以高效地杀灭生物膜内的粪肠球菌。