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第一部分阿替莫德(Atiprimod)体内外抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖及线粒体活化途径诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究【目的】套细胞淋巴痛(MCL)是一种预后差,临床治疗具有挑战性的恶性淋巴瘤。阿替莫德(Atiprimod)是阳离子两性分子复合物,它可抑制多种人类肿瘤细胞系的增殖。本研究目的是阐明Atiprimod治疗MCL、诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。【方法】Atiprimod体内外分别作用于四种MCL细胞系SP53,MINO,Grant 519、Jeko-1和从MCL患者组织、骨髓或外周血中分离出的新鲜肿瘤细胞,以及来源于5例正常人外周血的单个核细胞(PBMCs)。【结果】Atiprimod不仅能有效抑制四种MCL细胞系SP53,MINO,Grant 519,Jeko-1和来源于MCL患者的新鲜肿瘤细胞的增殖以及促进其凋亡,还可以显著抑制MCL-免疫缺陷(SCID)鼠动物模型体内瘤细胞的生长并明显延长其生存期。同时,Atiprimod还可抑制经PHA、PMA/ionomycin-、抗CD3和抗CD28单克隆抗体活化的正常人PBMC细胞增殖。重要的是Atiprimod对正常淋巴细胞显示为低毒性。Western免疫印记结果表明Atiprimod是通过激活c-Jun NH(2)-末端蛋白激酶(JNK)途径,抑制信使核糖核酸转录活化子(STAT3)和IκB活性。而且,Atiprimod还可上调MCL细胞表达Bax,Bad,和磷酸化Bcl-2水平。最终导致凋亡诱导因子(AIF)、线粒体细胞色素C的释放以及Caspase-9,-3和PARP的激活。经AIF抑制因子预处理后的MCL细胞能完全阻断凋亡的发生,而广谱的Caspase抑制因子则不能完全阻断MCL细胞凋亡。【结论】Atiprimod体内、外可有效抑制MCL增殖和诱导其凋亡,并且,主要是通过激活AIF信号传导途径诱导肿瘤细胞凋亡。本研究结果表明Atiprimod是一种很有前景的治疗MCL的靶向药物。第二部分万珂(Bortezomib)与美罗华(Rituximab)和环磷酰胺(Cyclophosphamide)体内、外协同诱导套细胞淋巴瘤细胞凋亡机制的研究【目的】评价万珂(bortezomib,BTZ)与美罗华(rituximab,RTX)和环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)联合治疗复发和转移的套细胞淋巴瘤(MCL)是否具有叠加或协同效应。【方法】分别用BTZ、RTX、CTX或三药联合组成的BRC方案作用于4种MCL细胞系:SP53,MINO,Grant 519和Jeko-1以及从3例复发和转移的MCL患者组织、骨髓或外周血中分离出的新鲜肿瘤细胞,通过分析细胞增殖和凋亡情况,判断BRC方案抗MCL细胞的叠加或协同效应。用Western blot方法探讨BTZ、RTX、CTX和BRC诱导MCL细胞凋亡的机制。建立MCL-严重免疫缺陷(MCL-SCID)鼠动物模型,用以评价BRC方案与其他对照治疗组体内治疗MCL效果。【结果】单药BTZ和CTX在体外可以有效抑制MCL细胞生长(P<0.01),且具有剂量依赖性。BTZ和CTX的IC50值(50%生长抑制率)分别是10-20 nM和5-20 mM之间。当固定RTX(10μg/mL)和CTX(10 mM)浓度,而不断增加BTZ药物浓度,可以显著性地抑制MCL细胞生长(P<0.01)。BRC方案对MCL细胞系和来源于患者的新鲜肿瘤细胞的凋亡诱导率分别为69.7%和92.6%(P<0.05 and P<0.01,与单药BTZ,RTX和CTX相比)。而且,BRC方案比单药提早活化caspases-8,-9,-3,和PARP凋亡信号。Caspases广谱抑制剂Z-VAD可以完全阻断由BRC诱导的MCL细胞凋亡。MCL-SCID鼠体内实验表明,BRC方案可以彻底消除MCL肿痛包块并延长70%受试鼠长期无病生存期至10周(动物实验截止),而单药治疗组和PBS对照组的荷瘤鼠存活期却少于5周。【结论】细胞毒类化疗药物联合BTZ和抗CD20单抗体内外可以有效的抑制MCL细胞增殖和诱导其凋亡。BRC可作为治疗复发和转移MCL的一个新的临床治疗方案。本研究结果为BRC方案治疗复发和转移MCL的临床前试验提供了理论依据。