在世界各国，脑卒中均有较高的发病率和致死、致残率，给社会和家庭带来沉重负担，寻找可以有效恢复神经功能的途径一直是脑缺血研究的热点。近年来，虽然神经干细胞为缺血性脑损伤的治疗带来新希望，但是由于伦理、来源、移植损伤和排斥等因素的影响，限制了其临床应用。然而，作为外周血干细胞动员剂的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在多种血液病治疗中的成功应用的经验以及外源性骨髓干细胞优先迁移到脑缺血部位并分化为神经细胞的能力提示我们：能否应用rhG-CSF动员自体干细胞的方法治疗缺血性脑损伤呢?这样既可以解决外源性神经干细胞移植的伦理争端和来源不足的缺陷，又可避免手术损伤和移植排斥的副作用。而且，已有研究发现rhG-CSF可以明显降低内脏缺血的死亡率、改善心肌缺血的预后；此外，与rhG-CSF同属造血因子的巨噬细胞集落刺激因子(G-CSF)和促红细胞生成素(EPO)已被证实有神经保护作用。那么rhG-CSF能否改善脑缺血的预后，从而在脑缺血中具有神经保护作用呢?本研究建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对实验性脑缺血再灌注损伤的预后、脑内细胞增殖和新生血管形成以及神经可塑性相关蛋白表达的影响，以期探讨rhG-CSF治疗缺血性卒中的可能性，并为其提供实验依据。 第一部分 rhG-CSF对大鼠脑缺血再灌注损伤预后的影响 首先应用流式细胞仪技术检测rhG-CSF用药前后外周血中的CD34阳性细胞百分率的动态变化，发现CD34阳性细胞显著增多，并于2d和7d出现两个高峰，证实rhG-CSF可以成功动员外周血干细胞；然后建立线栓法大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)／再灌注模型，观察rhG-CSF治疗对动物体重、死亡率、外周血白细胞计数和分类、神经功能评分和梗死面积的影响。结果显示：rhG-CSF可以使局灶性脑缺血再灌注动物较早恢复正常的体重增长；降低急性期的死亡率；减轻神经功能缺损；但对外周血白细胞计数和分类以及梗死面积无影响。rhG一CSF在实验性脑缺血中的神经保护作用的初步研究摘要 第二部分rh于CsF对大鼠脑缺血再灌注后 脑内增殖细胞、新生血管和成熟神经细胞的影响 建立线栓法大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型，应用免疫组织化学方法检测梗死区和/或其周边的5一澳一2一脱氧尿普(BrdU)、神经上皮干细胞蛋白(nestin)、VIII因子、微管相关蛋白一2(MAP一2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达，以研究rhG一CSF对细胞增殖、新生血管形成、神经元和神经胶质细胞的影响。结果显示:脑缺血再灌注7d，rhG一CSF治疗组的BrdU阳性细胞数和MAP一2表达较对照组显著增高，说明rhG一CSF治疗可以促进脑内的细胞增殖，抑制神经元死亡:再灌注14d和/或21d，治疗组的nestin表达增高而GFAP表达降低，说明rhG一CSF治疗可以促进神经功能修复，抑制胶质瘫痕的形成;再灌注7d、14d和21d，治疗组的姗因子表达均显著高于对照组，说明rhG一CSF可以促进血管增生和新生血管形成。加强缺血性脑损伤后的结构重建。 第三部分rhG一CSF对大鼠脑缺血再灌注后 神经可塑性相关蛋白表达的影响 建立线栓法大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型，应用反转录聚合酶链反应(RT一PCR)和免疫组织化学方法检测梗死区及其周边MAP一2和突触囊泡蛋白(SYN)的mRNA和蛋白表达，以研究rhG一CSF对与神经可塑性有关的蛋白表达的影响。结果显示:再灌注7d和/或14d，rhG一CSF治疗组的MAP一2和SYN蛋白较对照组有不同程度的增高:再灌注14d和/或21d，治疗组的MAP一2和SYN mRNA表达较对照组有不同程度的增高。说明局灶性脑缺血再灌注后，rhG一CSF治疗可以增强脑内神经可塑J胜相关蛋白的表达，从而有助于神经功能的恢复。 结论1.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以降低急性期死亡率。2.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以减轻神经功能缺损。3.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以促进脑内细胞增殖。4.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以抑制神经元死亡。5.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以促进新生血管形成。6.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以抑制胶质瘫痕形成。7.脑缺血再灌注损伤后，rhG一CSF治疗可以促进神经生长和突触重建。