银屑病是一种常见的与遗传相关的T淋巴细胞介导的慢性炎症性皮肤病,主要临床表现为鳞屑性红斑。其病因尚未完全阐明,难以根治,反复发作,长期用药不仅严重影响患者生活质量,而且造成了沉重的社会经济负担。中医理论认为血热为本病主要病机,采用清热凉血类中药,不仅可以明显缓解临床症状,延长银屑病复发时间,还可以调整患者体质,从而缓解银屑病的疾病进程。清热凉血方药与银屑病的发病特点及主要病机相符,具有清热凉血解毒功效。课题组前期的临床研究显示清热凉血方药具有良好的临床疗效,尤其对心烦、口渴等症状有明显改善。动物实验研究显示清热凉血方药具有明显抑制表皮细胞增生过快和促进颗粒层形成的作用,从而发挥抑制银屑病表皮增生和改善角化不全的作用。T淋巴细胞是银屑病发病的关键效应细胞,激活后可产生多种细胞因子,如IFN-γ、IL-6 等,这些物质可通过 JAKs/STATs、Notch、NF-κB、Wnt、MAPK等信号转导通路进行细胞内信号转导发挥致病作用,其中,JAKs/STATs通路为近年来的研究热点。细胞因子信号转换抑制因子(SOCS1)可以抑制JAKs/STATs通路,发挥治疗银屑病的作用。既往研究表明阻断细胞活性因子对角质形成细胞的作用可以抑制角质形成细胞的过度增殖、减少炎症因子的分泌,进而阻断银屑病的发生发展进程。研究清热凉血方药对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型生物学特性的影响,揭示其上调SOCS1对JAKs/STATs通路产生负性调节,减少IFN-γ等细胞因子的分泌从而发挥治疗银屑病的作用,将有助于进一步探讨清热凉血方药治疗银屑病的作用机理,丰富中医辨证治疗银屑病的理论。目的:观察不同浓度清热凉血方浸膏对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型SOCS1、STAT3、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1 表达水平的影响。方法:实验分为空白组、模型组、雷公藤多甙组、清热凉血方高、中、低浓度组,采用咪喹莫特乳膏外涂的方法建立银屑病小鼠模型,运用肉眼观察及HE染色观察小鼠皮肤改变情况及病理形态改变,评价银屑病小鼠模型;对不同组别小鼠给予相应试剂干预,运用形态观察、HE染色病理分析、免疫组化、实时荧光定量PCR、Western Blot等方法检测小鼠皮肤组织中SOCS1的变化情况,及JAKs/STATs 信号通路中 JAK1、STAT3、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1 定性及定量的表达。结果:(1)将咪喹莫特乳膏外涂于BALB/c小鼠背部备皮区,厚度约为1-2mm,2次/日,连续8天,小鼠皮肤表现出浸润性红斑、厚层银白色鳞屑,部分出现散在出血点等类银屑病样改变,HE染色镜下组织学特点表现为角化过度伴角化不全,棘层增厚,真皮浅层及血管周围炎细胞浸润,基本符合银屑病组织病理特征。(2)SOCS1在模型组小鼠角质形成细胞的细胞浆中表达较空白组增多,雷公藤多甙组及清热凉血方不同浓度浸膏组较模型组有不同程度的减少,其中以清热凉血方低浓度组浸润最少,雷公藤组、清热凉血方中浓度组、高浓度组依次增加;STAT3、JAK1在模型组小鼠角质形成细胞的细胞核中沉积明显,雷公藤多甙组及清热凉血方不同浓度浸膏组较模型组有不同程度的增加,其中以清热凉血方低浓度组浸润最少,雷公藤组、清热凉血方中、高浓度组依次增加。(3)SOCS1、STAT3、TNF-α、IL-6、IL-1、IFN-γmRNA 在模型组皮肤中 mRNA表达水平均较空白组增加,差异有统计学意义(P<0.05);雷公藤多甙组及清热凉血方不同浓度浸膏组各指标mRNA表达水平均较空白组增加,差异有统计学意义(P<0.05),较模型组不同程度降低,差异有统计学意义(P<0.05);其中,以清热凉血方高浓度组下降最为明显,其次依次为雷公藤多甙组、中浓度组、低浓度组。(4)SOCS1、STAT3、TNF-α、IL-6、IL-1、IFN-γ 蛋白在不同浓度清热凉血方组蛋白表达量均较空白组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中以模型组增加最为明显,清热凉血方低、中、高浓度组蛋白表达量依次递减,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)将咪喹莫特乳膏外涂于BALB/c雄性小鼠背部备皮区,厚度为1-2mm,2次/日,连续8天,可获得基本符合银屑病临床和病理表现的动物模型。(2)咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型靶皮损区TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6等炎症因子分泌增加,在一定程度上符合银屑病疾病特征。(3)清热凉血方可能通过抑制小鼠皮肤组织中JAKs/STATs信号通路的激活,减少TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6的分泌,从而发挥治疗银屑病的作用,并且与低剂量组相比,中、高剂量组的这种作用更为明显。