油菜与生菜的组织培养

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本文对甘蓝型油菜(Brassica napus L.)品种“蜀杂9号”进行了小孢子培养;并对生菜品种“红帆”进行了单细胞培养。结果是:在小孢子培养的试验中,用“蜀杂9号”油菜主花序的长4±0.5mm的花蕾分离出的游离小孢子,使用NLN、MS、B5培养基(蔗糖浓度使用130g/L),将小孢子的密度调节至104~105个/ml,先在32±1℃中培养48~60h,然后转入25±1℃培养,其中,在NLN培养基中培养的小孢子成胚率最高,并获得白色的愈伤组织。试验结果还表明,NLN培养基要优于MS或B5培养基;主枝花蕾优于侧枝花蕾;较低的蔗糖浓度(130g/L)要优于较高的蔗糖浓度(170g/L);高温诱导对小孢子的分裂启动是必须的;而加入活性炭的“液体—固体结合双层培养”方法在小孢子培养过程中没有起到很大的作用。在小孢子培养过程中进行观察,发现小孢子的分裂是小孢子的胞质先变得浓厚,开始逐渐膨大,细胞核也变大,且核的颜色加深;然后在小孢子细胞壁内,细胞核开始分裂,但是细胞壁并没有分裂,只是细胞壁内出现多个核;在正常分裂的小孢子中,有一部分逐渐长大,并最终突破了小孢子的细胞壁,长成为一团细胞团;最后观察到它们逐渐长大成为肉眼可见的白色愈伤组织。 在对生菜(Lactuca sativa)品种“红帆”的细胞培养试验中,进行了不同培养基、细胞密度、激素以及光照等因素对细胞培养成为愈伤组织的影响进行了对比试验。试验结果是:来源于此生菜品种的愈伤组织的单细胞在MS培养基中,并附加0.5mg/L 6-BA和0.1mg/L NAA两种激素,将细胞密度调节至5x104个/ml,置于暗中,25℃进行培养,愈伤生成率最高。比较其培养过程,我们可以看到:MS培养基对生菜细胞培养有着同BS培养基相差无几的效果:而细胞密度则是影响生菜细胞培养的一个重要因素,细胞密度与细胞的生长速度成反比;激素是另一个影响生菜细胞生长的重要因素,在较低浓度6一BA和NAA的共同作用下,细胞生长旺盛;而光照则会降低细胞的生长速度。生菜的单细胞在培养过程中,进行了单细胞一2细胞期一4细胞期一8细胞期一愈伤组织团块的生长方式。
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