油菜miRNA167调控BnNRAMP1响应镉胁迫的功能研究

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microRNA(miRNA)是一类非编码、长度为20-24个核苷酸的内源单链小分子RNA,通过对靶基因转录后水平的调控,在植物的生长发育、生成代谢、信号转导、胁迫调控等过程中发挥着重要的作用。NRAMP蛋白是一类定位于生物膜上的金属转运体,在植物离子的吸收与转运过程中发挥着重要的作用。本研究以甘蓝型油菜(Brassica napus)材料,以前期利用降解组测序得到的miR167及其靶基因BnNRAMP1作为研究对象,分析了 miR167和BnNRAMP1响应镉胁迫的内在调节机制。首先,我们研究了 miR167可能参与调节油菜对镉胁迫的响应。结果显示,miR167的前体Pri-miR167a,b,c均在镉胁迫下表达下调,miR167的成熟片段在地下部分表达下调,在地上部分则表达上调,而其靶基因BnNRAMP1则被镉诱导表达。分析miR167及其靶基因BnNRAMP1的组织表达模式发现,miR167的三个前体Pri-miR167a,Pri-miR167b,Pri-miR167c,在油菜发育的不同时期和不同组织表达情况不同,而其靶基因BnNRAMP1则主要在油菜的根和叶片中表达。其次,我们分析了甘蓝型油菜中所有NRAMP家族蛋白的生物信息学分析。由于BnNRAMP1和拟南芥AtNRAMP1的序列相似度高达91%。为了研究BnNRAMP1在生理功能上和AtNRAMP1相似性,我们通过构建BnNRAMP1和m8BnNRAMP1(能抵抗miR167的切割)的过表达载体分别异源转化拟南芥野生型(Col)WT和AtNRAMP1基因缺失突变体nramp1-1。研究发现,AtNRAMP1基因的缺失增加了拟南芥对镉的耐受性,主要表现在根的生长状况上。最后,我们在酵母中验证了对Mn,Cd的转运,并且发现BnNRAMP1相比于AtNRAMP1还能转运Zn。
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