【摘 要】
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本文根据睾丸酮丛毛单胞菌中3α-羟基类固醇脱氢酶/羰酰基还原酶是降解环境中甾体类激素的关键酶这一特点、其表达的抑制子蛋白RapA能够与3α-HSD启动子基因特异性结合这一原
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本文根据睾丸酮丛毛单胞菌中3α-羟基类固醇脱氢酶/羰酰基还原酶是降解环境中甾体类激素的关键酶这一特点、其表达的抑制子蛋白RapA能够与3α-HSD启动子基因特异性结合这一原理、甾体类激素能够使萤火虫荧光发光淬灭这一现象,利用基因工程重组技术以质粒P6为模板构建了调控质粒pUC-4289,将报告基因萤火虫荧光素酶基因连接到了3α-HSD基因启动子后面,构建了报告质粒pK-3a-LUC,将其分别转化大肠杆菌HB101,并制备了相应的调控非细胞体系和报告非细胞体系,从而建立了检测甾体类激素的生物化学发光检测方法,发光强度与甾体类激素浓度呈负相关。对其方法学进行了优化,并初步应用,与HPLC检测结果进行了对比,证明了该方法可行。该方法是一种灵敏、快速、易操作、高通量、成本低、能检测环境中所有已知及未知甾体类激素的新型检测方法,在环境监测和食品安全等领域具有较大实用价值。
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