目的：　　 ARR1和ARR2为Arms基因家族成员,近年来研究发现:ARR1、ARR2作为接头蛋白或支架蛋白可以介导GPCRs信号,并参与GPCRs和其他信号通路的对话,如:NF-κB信号通路,从而参与到其他信号通路的调节中。　　 转录因子NF-κB普遍存在于真核细胞中,NF-κB的激活受上游分子的精确调控。P80片段是前期筛选的IκB上游调控子的一个分子,研究表明其激活可以使IL-1诱导的NF-κB激活,启动靶基因转录,引起炎症反应。激活的NF-κB调节依赖其信号通路的负调节蛋白,如IκBα,Twist,Bcl-3,A20,前列腺素E2。NF-κB的负调节环路能够阻止NF-κB过度和延长激活,对于限制炎症损伤至关重要。我们小组前期在国际上报道表明:TFF3可以诱导NF-κB同源二聚体p65/p65的瞬时激活,并伴随Twist蛋白表达。　　 肠三叶因子3(TrefoilFactor3,TFF3)是三叶因子家族的成员,是一种调节性小肽。虽然TTF3最早是作为一种分泌性蛋白被发现,但近年研究提示TTF3与该家族成员TTF2相似,都可能通过与受体蛋白/结合蛋白作用在细胞信号网络中发挥独特功能。我们在国际上报道了:Twist介导TTF3瞬时激活NF-κB的炎性细胞因子的生成。　　 Twist基因是最早在果蝇中发现的一种碱性螺旋-环-螺旋结构的转录因子,Twist基因5’端调节区域的启动子序列上游有NF-κB结合位点,能与转录因NF-κB相互作用。近期发现Twist作为NF-κB信号通路的负调控因子,抑制NF-κB依赖的转录激活,调节转录。　　 我们小组前期研究表明:TFF3诱导NF-κB瞬时激活,Twist介导激活的NF-κB下游炎性细胞因子的生成,其机制涉及IκB磷酸化和部分降解,同时TFF3上调Twist蛋白表达。研究显示ARR1、ARR2参与TNF-α、UV、LPS、TLR/IL-1受体、溶血磷脂酸(LPA)等诱导的不同上游调控的NF-κB信号通路的调节,并因细胞类型、激活状态、以及刺激因子的不同产生特异效应。但ARR家族成员对TFF3诱导的NF-κB信号通路的作用并不清楚,本研究意在探讨TFF3如何参与此类家族成员调节及该调节应答可能通过TFF3重要的介导子Twist及NF-κB上游调节子p80片段对TFF3-Twist-NF-κB信号通路的调节机制。　　 方法：　　 1、构建实验相关质粒。　　 2、RT-PCR和WesternBlot方法检测TFF3调节的ARR1、ARR2表达变化。　　 3、双荧光素酶报告系统分析过表达ARR1、ARR2对TFF3诱导的NF-κB启动子活性的调节。　　 4、免疫共沉淀验证TFF3诱导的ARR1、ARR2与Twist在体内的相互作用。　　 5、GST-pulldown实验验证ARR1、ARR2与Twist在体外的直接作用。　　 6、免疫共沉淀验证TFF3诱导的ARR1、ARR2与p80片段在体内的相互作用。　　 7、WesternBlot方法检测干扰和过表达Twist,检测p80片段表达情况。　　 结果：　　 1、TFF3上调ARR1、ARR2转录和翻译水平表达。　　 2、双荧光素酶报告系统证实ARR1、ARR2能够增强TFF3诱导的NF-κB启动子活性。　　 3、免疫共沉淀证实ARR1、ARR2与Twist在体内的相互作用,且在TFF3存在时互作增强。ARR1和ARR2与Twist的互作可能受TFF3的差异性调节。　　 4、GST-pulldown实验证实ARR1、ARR2与Twist在体外直接互作。　　 5、免疫共沉淀证实ARR1、ARR2与p80片段在体内的相互作用,且在TFF3存在时互作减弱。　　 6、干扰Twist表达后,p80片段的蛋白水平表达上调;过表达Twist,p80片段的蛋白水平表达下调。　　 结论：　　 IEC细胞中ARR1、ARR2表达受TFF3调节,ARR1、ARR2使TFF3诱导的NF-κB启动子活性增强,其机制可能是ARR1、ARR2通过与Twist和p80片段互作参与TFF3-Twist-NF-κB通路的调控,并且Twist对NF-κB的调节作用需要NF-κB上游特异调节子p80片段介导来实现。