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卵透明带是发展孕前型避孕疫苗的一个理想的靶抗原。然而卵透明带抗原免疫可能引起的卵巢结构与功能的异常是发展卵透明带避孕疫苗的一个障碍。为探讨采用粘膜免疫方法在输卵管局部诱发抗卵透明带抗体，阻断受精，避免干扰卵巢的结构与功能，发展口服DNA卵透明带避孕疫苗的可行性，本研究构建了pVAX1-pZP3α重组质粒，制备甲壳糖免疫微球，研究其在体外表达和在体内诱发粘膜免疫反应的能力。 根据pZP3α全长DNA序列和哺乳动物细胞表达载体pVAX1的要求设计一对引物，PCR扩增出pZP3αDNA片段，插入到载体DVAX1中，构建重组质粒pVAX1-pZP3α。采用PCR、双酶切及DNA测序等方法鉴定重组质粒。用脂质体法将pVAX1-pZP3α转染HeLa细胞，采用RT-PCR法检测pZP3αmRNA的转录，以免抗pZP3抗血清为第一抗体，用Western blot和免疫荧光法检测卵透明带抗原pZP3α在转染HeLa细胞中的表达。以甲壳糖为释放系统制备DVAX1-pZP3α质粒DNA甲壳糖免疫微球。采用口服途径免疫雌性BALB/c小鼠，用口服甲壳糖和肌肉注射pVAX1-pZP3α质粒裸DNA的小鼠作对照，用ELISA法检测免疫动物血清、阴道冲洗液和输卵管冲洗液的抗卵透明带抗体反应并用免疫荧光法检测免疫动物输卵管组织的IgA抗体。 研究结果表明，设计的pZP3αDNA片段正确插入到pVAX1，构建成pVAX1-pZP3α重组质粒。体外转染的HeLa细胞通过PT-PCR检测到卵透明带抗原pZP3αmRNA的转录，在细胞培养上清中通过Western blot检测到pZP3α抗原的微量表达，免疫荧光染色HeLa细胞发出明亮的绿色荧光，提示pVAX1-pZP3α在体外HeLa细胞中主要表达胞内和膜结合蛋白。口服pVAX1-pZP3α质粒DNA甲壳糖免疫微球免疫组的多数小鼠血清产生了较明显的抗卵透明带IgA抗体，而且也在小鼠小肠检测到抗卵透明带IgA抗体，但未能在血清检测到抗卵透明带IgG抗体反应。口服甲壳糖和肌肉注射pVAX1-pZP3α质粒裸DNA的小鼠均未能检测到抗卵透明带IgA或IgG抗体反应。用免疫荧光法进一步检测口服pVAX1-pZP3α质粒DNA甲壳糖免疫微球免疫组小鼠的输卵管组织切片，结果显示其输卵管粘膜组织免疫荧光强度比口服甲壳糖对照组小鼠输卵管粘膜组织免疫荧光强度明显增强。 上述实验结果证明 OZP3 a DNA正确插入载体 OVAXI，构建成 OVAXI－OZP3 o重组质粒，用 PVAX IPZP3 Q质粒 DNA甲壳糖免疫微球口服免疫小鼠，能够在小鼠输卵管粘膜诱导粘膜免疫反应，为进一步研究卵透明带DNA避孕疫苗口服免疫，克服卵透明带免疫引起的卵巢功能紊乱提供有参考价值的资料。