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WRKY基因家族是一类典型的能够编码转录调控因子的基因家族。目前已知WRKY基因的功能广泛地涉及植物对逆境胁迫的响应及植物保护、结构发育等过程。WRKY基因能被多种生物和非生物胁迫因子诱导不同程度的表达。蒙古柳WRKY蛋白基因与抗盐碱性相关的功能研究未见报道。本研究利用RT-PCR技术从蒙古柳cDNA中克隆到了一个开放阅读框(ORF)为1425bp,编码475个氨基酸的序列,经BLAST比对确定其含有一个WRKY结构,系统进化树表明其与毛果杨的WRKY28基因同源性最高。所以命名为SmWRKY28。 实时荧光定量PCR检测到Sm WRKY28基因在蒙古柳的根、茎、叶、花、雌雄花均有表达,且雌性植株较雄性植株高;Northern blot分析表明SmWRKY28在150mMNaCl、30mM NaHCO3、100μM Me-JA处理下随着胁迫时间的延长表达量也随之增加,但30mM NaHCO3处理48h是表达量最明显。 将35S-Sm WRKY28-GFP融合基因通过基因枪导入洋葱表皮细胞,荧光显微镜下观察显示其融合蛋白在细胞核中行使其功能;小量诱导优化pGEX-6p-3-SmWRKY28在宿主BL21中原核蛋白的表达条件,表明在1mM IPTG下的最佳诱导时间为5h。GST-Sm WRKY28融合蛋白大量诱导纯化得到以包涵体的形式稳定存在,约为78kD。 通过过表达SmWRKY28基因的拟南芥萌发后期抗性分析实验表明,在80、100、150mM NaCl和2、4、6mM NaHCO3及15、30、75μM Me-JA的1/2MS平板上过表达Sm WRKY28的拟南芥长势优于野生型,表现出了较强的抗盐碱性,并且在NaCl胁迫下过表达SmWRKY28基因的拟南芥的鲜重比野生型高,但MDA(丙二醛)含量低于野生型,说明SmWRKY28基因与抗盐碱性有关,并且提高了植株的抗氧化能力。在NaHCO3胁迫下过表达SmWRKY28的拟南芥的叶绿素含量和鲜重都优于野生型,进一步说明了Sm WRKY28转录调控因子与抗盐碱性有关。 通过农杆菌介导法将gus基因转入蒙古柳,以及gus染色证明转基因蒙古柳具有β-半乳糖苷酶活性,建立蒙古柳的遗传转化体系,为进一步解析SmWRKY28基因的功能准备了材料可用于分子植物育种,为创造抗逆的新品系打下了基础。