【摘 要】
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目的:构建携带神经生长因子基因序列的5型腺病毒Ad-NGF,并研究Ad-NGF在促进周围神经修复与再生中的作用。方法:将NGF基因序列克隆至5型腺病毒穿梭质粒pCA13并在HEK-293细胞中
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目的:构建携带神经生长因子基因序列的5型腺病毒Ad-NGF,并研究Ad-NGF在促进周围神经修复与再生中的作用。方法:将NGF基因序列克隆至5型腺病毒穿梭质粒pCA13并在HEK-293细胞中包装出毒得到重组腺病毒Ad-NGF并测序鉴定。将构建的重组腺病毒Ad-NGF转染入大鼠坐骨神经损伤模型,使神经生长因子在大鼠坐骨神经损伤模型中过表达,并以直接局部注射神经生长因子为对照,通过RT-PCR及Western-blot技术定量检测大鼠损伤坐骨神经中神经生长因子mRNA及蛋白的表达、坐骨神经功能指数、神经电生理测定及组织切片病理观察,评价大鼠损伤坐骨神经恢复的情况。结果:序列测定证明NGF序列被成功构建到5型腺病毒载体中;Ad-NGF组较之直接局部注射神经生长因子组的NGF mRNA及NGF蛋白表达量显著增多,空腺病毒组及NS阴性对照组的NGF mRNA及NGF蛋白表达量较之前两者明显较少(P<0.05); Ad-NGF组的坐骨神经功能指数及神经传导速度明显优于其余各组(P<0.05)。结论:本研究成功构建了携带神经生长因子基因序列的5型腺病毒Ad-NGF。其较之NGF局部连续给药的方法,其能在损伤神经局部持续大量地表达NGF mRNA及蛋白,有明显促进周围神经修复与再生的作用。
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