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目的:氧化应激指的是机体内氧化与抗氧化失衡的一种状态,并且倾向于促氧化反应。而过度的氧化应激被认为是导致许多疾病,例如肺部疾病、高血压、糖尿病等疾病的诱因。因此,抗氧化应激方面的研究对于疾病的预防和延缓疾病发生具有重要的意义。水苏碱作为我国传统中药益母草的主要活性成分之一,近年来在治疗心肌纤维化、治疗心血管疾病、抗炎症等方面均发挥着重要的作用,但是对于其抗氧化应激方面的研究较少。因此,本论文旨在基于网络药理学方法探讨水苏碱可能具有的抗氧化应激损伤作用及其机制。方法:1.网络药理学分析方法。CTD数据库获得氧化应激相关蛋白;TCMSP、BATMAN-TCM、Pharm Mapper数据库以及Swiss Target Prediction平台预测水苏碱靶蛋白;VENNY在线平台获得上述两部分交集蛋白;STRING数据库建立蛋白质之间相互作用网络;Metascape平台实现GO富集和KEGG通路分析。2.实验验证研究方法。使用H2O2构建A549和HUVEC细胞氧化应激损伤模型;CCK-8法检测不同浓度水苏碱对A549和HUVEC细胞活性的影响;CCK-8法筛选水苏碱对A549和HUVEC细胞氧化应激损伤保护作用的最适浓度。水苏碱抗A549和HUVEC细胞氧化应激生化指标SOD和MDA检测。q PCR法检测水苏碱对A549和HUVEC细胞抗氧化基因Nrf2、HO-1、NQO1和GSTP1表达水平的影响;Western blot法检测水苏碱对A549和HUVEC细胞抗氧化基因HO-1、NQO1和GSTP1蛋白表达水平的影响。结果:1.网络药理学分析结果。（1）交集蛋白的获取获得氧化应激相关蛋白765个,水苏碱预测靶蛋白156个,交集后得到18个蛋白,这些蛋白均与氧化应激相关。（2）蛋白质-蛋白质相互作用网络的构建STRING数据库构建水苏碱-氧化应激蛋白质相互作用网络,其中14个蛋白处于同一相互作用网络,具有相互作用关系,另外2个蛋白之间也具有相互作用。（3）GO分析和KEGG信号通路分析GO富集结果包括对氧化应激的反应、谷氨酰胺家族氨基酸代谢过程、对活性氧反应等生物过程及酰胺结合的分子功能;KEGG通路分析得到精氨酸和脯氨酸代谢、松弛素信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化等通路。我们选取流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路中与氧化应激密切相关的Nrf2通路进行水苏碱抗氧化应激的实验研究。2.验证实验结果。（1）H2O2细胞氧化应激损伤模型的构建采用A549和HUVEC两种细胞构建氧化应激损伤模型。与未经H2O2处理的正常对照组相比,3mmol/L H2O2处理1小时,A549细胞存活率为49.81±7.5%（p＜0.05）;1mmol/L H2O2处理1小时,HUVEC细胞存活率为47.38±2.7%（p＜0.05）。因此,选择上述浓度构建细胞氧化应激损伤模型。（2）检测不同浓度水苏碱对细胞活性的影响不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）水苏碱分别作用于A549和HUVEC细胞24小时,与培养液对照组相比,A549和HUVEC的细胞活性均升高（p＜0.05）,并呈浓度依赖关系,表明上述浓度水苏碱对细胞无毒性作用。（3）筛选水苏碱对细胞氧化应激损伤保护的最适浓度20μmol/L水苏碱预处理A549和HUVEC细胞24小时后再使用相应浓度H2O2刺激1小时,与H2O2氧化损伤模型组相比,水苏碱预处理A549（p＜0.05）和HUVEC（p＜0.05）细胞活力均显著升高。（4）水苏碱抗细胞氧化应激生化指标的检测与3mmol/L H2O2氧化损伤模型组相比,20μmol/L水苏碱预处理A549细胞24小时,SOD活性明显上升（p＜0.05）,MDA水平显著下降（p＜0.05）。与1mmol/L H2O2氧化损伤模型组相比,20μmol/L水苏碱预处理HUVEC细胞24小时,SOD活性明显上升（p＜0.05）,MDA水平显著下降（p＜0.05）。（5）q PCR法检测水苏碱对Nrf2信号通路相关基因表达的影响与空白对照组相比,20μmol/L水苏碱处理A549和HUVEC细胞24小时,HO-1表达水平降低（p＜0.05）,NQO1、GSTP1和Nrf2表达水平显著升高（p＜0.05）;与氧化应激损伤模型组相比,20μmol/L水苏碱预处理A549和HUVEC细胞组,HO-1表达水平降低（p＜0.05）,NQO1、GSTP1和Nrf2表达水平显著升高（p＜0.05）。此外我们还检测了水苏碱作用不同时间对Nrf2信号通路相关基因表达的影响。A549细胞组,HO-1表达水平在2小时和12小时升高（p＜0.05）;NQO1表达水平在2小时和4小时显著升高（p＜0.05）,呈先增高后降低的趋势;GSTP1表达水平在2小时、4小时显著降低（p＜0.05）,在8小时升高至正常值附近（p＞0.05）,之后持续升高,在12小时显著升高（p＜0.05）,呈先降低后升高的趋势;Nrf2表达水平在2小时、4小时、8小时和12小时均显著升高（p＜0.05）,。HUVEC细胞组,HO-1和NQO1表达水平在2小时、4小时、8小时和12小时均升高,呈先增高后降低的趋势（p＜0.05）;GSTP1表达水平在2小时、4小时显著降低（p＜0.05）,在8小时和12小时显著升高（p＜0.05）,总体呈先降低后升高的趋势;Nrf2表达水平在2小时、8小时和12小时均升高（p＜0.05）,4小时无明显变化（p＞0.05）。（6）Western blot法检测水苏碱对Nrf2信号通路相关蛋白表达的影响A549细胞和HUVEC细胞,与空白对照组相比,20μmol/L水苏碱单独处理24小时后HO-1蛋白表达无明显变化（p＞0.05）,NQO1和GSTP1蛋白表达升高（p＜0.05）;与H2O2损伤模型组相比,使用20μmol/L水苏碱预处理,A549细胞组,HO-1和GSTP1蛋白表达下降（p＜0.05）,NQO1蛋白表达升高（p＜0.05）;HUVEC细胞组,HO-1蛋白表达无明显变化（p＞0.05）,NQO1和GSTP1表达升高（p＜0.05）。结论:水苏碱可能具有抗氧化应激作用,激活Nrf2信号通路可能是其发挥抗氧化应激作用的重要途径。