鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。由于病毒血清型和基因型的多样性导致了疫苗使用的局限性，对于养鸡生产具有严重的危害性。当前检测IBV抗体的方法主要有血凝抑制试验、中和试验、对流免疫试验、琼脂扩散试验以及酶联免疫吸附试验。由于IBV不同型毒株间的交叉保护力弱或不存在交叉保护现象，使许多抗体检测方法都有了很大的局限性。当前商品化的IBV抗体检测试剂盒多采用全病毒粒子包被，临床上对地方毒株的检测灵敏性和特异性也有一定的局限性，再加上其成本高昂，使得IBV抗体的临床检测效果不尽理想。本课题设计了以广西地方分离株GX-YL5的N基因，和部分S1与N的串联表达蛋白为基础，初步建立以IBV结构蛋白为抗原的间接ELISA检测方法，并与商品化抗体检测试剂盒比较，旨在解决IBV地方毒株抗体检测的灵敏性特异性以及对变异株和非变异株抗体检测问题。　　 1、构建GX-YL5株N蛋白基因的原核表达载体pGEX-4T-N，成功表达可溶性N蛋白，并初步建立了以表达N蛋白为基础的IBV抗体的N-ELISA检测方法，并与商品化试剂盒检测对比。结果表明，在检测广西地方分离株GX-NN7，GX-YL5和GX-YL9的抗体水平时，N-ELISA的结果体现出了商品化试剂盒不能体现的抗体递增水平，而在检测H120免疫抗体时，N-ELISA方法与试剂盒检测结果一致。表明所建立的N-ELISA比商品化试剂盒检测更敏感，成本更低。在对临床的90个样品的检测中，商品化试剂盒检测阳性率为81％(73/90)，所建立的N-ELISA检测阳性率为73％(66/90)，检测结果基本一致，吻合度高。　　 2、利用生物信息学软件分析了IBV的S1基因的亲水性、抗原性和表位可能性，筛选出综合因素较好的一段序列(240aa-330aa)与N基因以融合蛋白技术结合桥式PCR方法进行串联，并以S1+N和N+S1两种取向构建原核表达载体，成功表达了S1+N和N+S1两种包涵体蛋白，并分别以此为抗原分别建立了相应的间接S1-N-ELISA和N-S1-ELISA，通过与N-ELISA方法和商品化试剂盒的检测结果对比分析，间接S1-N-ELISA和N-S1-ELISA的检测结果基本一致，而在检测疫苗株H120和GX-NN7，GX-YL5，GX-YL9与GX-NN2四种广西地方分离株时，除了表现出抗体递增趋势外，在检测地方毒株GX-NN2的抗体水平上比N-ELISA表现出了更明显的抗体梯度。在对临床的90个样品的检测中，商品化试剂盒检测阳性率为81％(73/90)，所建立的两种串联蛋白的S1-N-ELISA和N-S1-ELISA检测阳性率均为75％(68/90)，吻合度高，表明这种串联表达的蛋白的S1-N-ELISA和N-S1-ELISA比单独N蛋白的N-ELISA检测范围上有了增加，更具有临床应用价值。