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本文根据GenBank中巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因核苷酸序列（登录号：HM582882）分别设计了含信号肽和去信号肽两对特异性引物，通过PCR方法扩增青海省牦牛源多杀性巴氏杆菌（(Pasteurella mutocida，Pm)分离株P0910的OmpH基因，分别得到含信号肽的OmpH片段(HM)和成熟外膜蛋白H的OmpH基因，再分别克隆到pMD19-T Simple载体上，然后进行序列测定和分析。结果表明，含信号肽的基因全长1005bp，包含一个完整的开放阅读框，编码334个氨基酸，前20个氨基酸为信号肽序列。成熟外膜蛋白含有一个945bp的开放阅读框，编码314个氨基酸。为了获得可溶性的蛋白，本实验进行了不同表达载体的选择。首先将成熟外膜蛋白H基因克隆到pET-32a载体和pCold I载体上，分别转入BL-21，经IPTG诱导表达后得到的重组蛋白几乎都以包涵体形式存在。然后将OmpH基因克隆到pMAL-c2x表达载体中，构建原核重组表达质粒pMAL-c2x-OmpH，转化大肠杆菌BL-21并进行诱导表达。SDS-PAGE结果表明：重组融合蛋白（MBP-OmpH）大小为76KDa，且以包涵体和可溶形式存在。将可溶形式的蛋白经亲和层析柱进行纯化，得到了纯度较高的OmpH融合蛋白，Western-blot检测结果表明，重组融合蛋白能与全菌灭活苗免疫血清发生特异性反应。将纯化的重组融合蛋白、外膜蛋白和灭活全菌制成疫苗免疫小鼠，同时设生理盐水对照组。免疫三次，间隔均为两周。每次免疫后第14天对每组小鼠进行断尾采血并分离血清，通过ELISA检测血清抗体效价。结果表明：重组蛋白组小鼠抗体水平明显高于免疫组和对照组。免疫3次后对小鼠进行攻毒，结果表明：重组融合蛋白、外膜蛋白和全菌灭活苗组小鼠均能抵抗菌株P0910的致死性攻击，对小鼠的保护率达到90%，生理盐水对照组则完全没有保护。综上，本研究测定并分析了青海省牦牛源多杀性巴氏杆菌分离株P0910外膜蛋白H的基因序列，成功构建了OmpH的可溶性原核表达系统，获得了重组融合蛋白。免疫小鼠和攻毒实验表明，重组融合蛋白具有良好的免疫原性，能够诱导小鼠产生保护性抗体，为进一步开展多杀性巴氏杆菌OmpH的功能研究进而防治牦牛出血性败血症奠定了基础。