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目前临床治疗中使用的人IL-2为将其氨基酸序列第125位半胱氨酸（Cys）突变为丙氨酸（Ala），以保证IL-2上其余两个Cys能够形成正确的二硫键结构。最近五年，有研究者通过IL-2的单克隆抗体封闭了IL-2上与IL-2R (CD25)结合的相关位点，结果这种新产生的IL-2-单克隆抗体复合物在体内刺激效应T细胞增殖的能力是天然IL-2的2倍以上，并显著延长了在生物体内的半衰期。后续研究显示，这种封闭了与IL-2R结合的相关位点的IL-2-单克隆抗体复合物在对抗黑色素细胞瘤的治疗过程中仅以1/40的剂量就可以起到与天然IL-2同等的效果，并且副作用微乎其微。本研究通过生物信息学手段分析，对绵羊IL-2上与IL-2R结合有关的位点进行突变，旨在使目的产物roIL-2不再对IL-2R βγ具有高亲和性，从而达到与使用单克隆抗体封闭IL-2上与IL-2R结合的相关位点相似或更优化的效果，即提高刺激效应T细胞的增殖的能力，减少副作用。我们采用人工合成的方式合成了roIL-2的全序列，突变掉了绵羊IL-2基因上与IL-2R结合的相关位点，并在该基因5′端设计上SnaB I酶切位点，3′端设计上EcoR I酶切位点。使用SnaB I和EcoR I对合成基因进行双酶切，将roIL-2基因插入经过相同双酶切处理的毕赤酵母系统中分泌型表达载体pPIC9K中，经限制性内切酶酶切鉴定分析正确，成功地构建了真核表达载体pPIC9K-roIL2。将真核表达载体pPIC9K-roIL2转化毕赤酵母宿主菌GS115，经过多轮筛选，得到了具有高浓度G418抗性的快甲醇利用型（Mut+）转化子，命名为GS115-roIL2。使用MM培养基对GS115-roIL2进行诱导表达。将不同时段的诱导表达上清收集起来并使用羊IL-2ELISA试剂盒进行定量分析，发现经72h的甲醇诱导表达，上清液中roIL-2的含量约为1mg/L。通过SDS-PAGE分析显示目的蛋白分子量大小约为15kDa，与理论预期相符。将诱导表达的roIL-2注入小鼠体内检测其对小鼠免疫系统的影响，以注射同等剂量的天然羊IL-2作为阳性对照，发现在健康状态下，注射roIL-2的小鼠血浆中CD4+/CD8+分子比值平均值为2.3945，高于注射正常绵羊IL-2的小鼠（1.2510）且效果极显著；在抗病状态下，注射roIL-2的小鼠血浆中CD4/CD8分子比值平均值为2.3712，同样高于注射正常绵羊IL-2的小鼠（1.0168）且效果极显著。实验结果表明roIL-2相对于天然绵羊IL-2在提升机体免疫功能的效果方面有极显著的提高。对roIL-2的纯化工艺、大规模表达条件、免疫活性增强的机理有待于进一步研究。