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研究目的:骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤之一,其进展快、侵袭性强、易早期肺转移、且易耐药等特性给骨肉瘤的治疗带来巨大的困难。随着新辅助化疗、靶向治疗、免疫治疗等治疗方式的不断进展,骨肉瘤患者的五年生存率有了一定提高。然而近些年来,骨肉瘤的治疗效果已趋于平台期。因此,积极探索骨肉瘤的发生发展机制,寻找更加有效的诊断及治疗靶点,进一步完善骨肉瘤的治疗方案就具有重要意义。近年来,人们逐渐意识到Lnc RNAs有望成为肿瘤潜在的诊疗靶点,其中Lnc RNA hotairm1更是在多种肿瘤中扮演着重要角色,但其在骨肉瘤中的作用则并不清楚。本文旨在探究Lnc RNA hotairm1在骨肉瘤中的特异性表达,以及与骨肉瘤临床病理指标的相关性,对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和成瘤的调控作用及具体机制。争取为骨肉瘤的诊治提供新的潜在生物靶点,同时也为临床中靶向Lnc RNA hotairm1治疗骨肉瘤提供理论依据。研究方法:第一,我们通过q PCR技术检测骨肉瘤及癌旁正常组织中Lnc RNA hotairm1的表达差异,分析了Lnc RNA hotairm1与骨肉瘤预后等指标的关系,并通过免疫组化实验检测了Lnc RNA hotairm1与肿瘤增殖指标Ki67的关系。第二,我们通过核质分离及FISH实验来确认Lnc RNA hotairm1在骨肉瘤细胞中的定位。我们还通过过表达及沉默骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS中Lnc RNA hotairm1,并运用CCK8、克隆形成、划痕实验、transwell实验、流式细胞术、裸鼠荷瘤等技术,来探究Lnc RNA hotairm1对骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS增殖、迁移、侵袭、凋亡和裸鼠体内成瘤等肿瘤特性的影响。第三,我们通过生物信息学预测Lnc RNA hotairm1靶向的mi RNA,并利用双荧光素酶报告基因实验及q PCR验证二者的靶向结合关系,最后通过挽救实验,探究Lnc RNA hotairm1调控mi R-106a-5p影响骨肉瘤细胞的机制。第四,我们通过生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证XIAP与mi R-106a-5p的靶向结合关系,通过免疫印记及q PCR实验探索在骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS中,Lnc RNA hotairm1调控mi R-106a-5p、XIAP及凋亡相关通路的机制。研究结果:第一,Lnc RNA hotairm1在骨肉瘤组织中的表达量显著高于癌旁正常组织,且高表达Lnc RNA hotairm1组的Ki67蛋白表达显著高于低表达Lnc RNA hotairm1组。临床相关分析的结果提示,肺转移及复发骨肉瘤患者Lnc RNA hotairm1的表达水平更高,Kaplan-Meier生存分析的结果提示高表达Lnc RNA hotairm1的骨肉瘤患者预后往往更差。第二,Lnc RNA hotairm1在骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS中的表达显著高于成骨细胞系,且在骨肉瘤细胞核及细胞质中均有分布,在细胞质中的表达更高。在骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS中,pc DNA-hotairm1组较对照组的增殖、迁移、侵袭、裸鼠体内成瘤的能力更强,细胞凋亡率则更低;而sh-hotairm1组的增殖、迁移、侵袭、裸鼠体内成瘤的能力更弱,细胞凋亡率更高。第三,通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因及q PCR实验,我们发现Lnc RNA hotairm1可靶向结合mi R-106a-5p,且二者呈负相关。此外mi R-106a-5p在骨肉瘤组织及细胞系143b和MNNG-HOS中的表达显著性降低。sh-hotairm1+mi R-106a-5p inhibitor组较sh-hotairm1组增殖、迁移、侵袭能力更强,细胞凋亡率更低。第四,生物信息学分析、双荧光素酶报告基因及q PCR实验结果提示,mi R-106a-5p可靶向结合XIAP,且在骨肉瘤组织中XIAP与mi R-106a-5p呈负相关,与Lnc RNA hotairm1呈正相关。XIAP在骨肉瘤的组织及细胞系143b和MNNG-HOS中的表达显著升高。sh-hotairm1组裸鼠瘤体XIAP的m RNA及蛋白水平较对照组显著降低。骨肉瘤细胞系143b和MNNG-HOS中,sh-hotairm1+mi R-106a-5p inhibitor组较sh-hotairm1组的XIAP蛋白表达更高,凋亡相关蛋白Caspase7及Caspase9表达更低。研究结论:Lnc RNA hotairm1在骨肉瘤组织及细胞系中表达升高,且高表达Lnc RNA hotairm1的患者,预后更差,肺转移及复发的比例更多。Lnc RNA hotairm1可通过竞争性内源RNA机制结合mi R-106a-5p来调控XIAP,进而抑制凋亡相关通路,促进骨肉瘤的增殖、迁移、侵袭,抑制骨肉瘤的凋亡。Lnc RNA hotairm1可作为骨肉瘤诊治的潜在靶点。图32幅,表2个,参考文献97篇