朊蛋白（Prion protein,PrP）是一种高度保守的糖蛋白,由Prnp基因编码的254个氨基酸构成,通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）结构锚定在细胞膜表面,并在体内组织及器官中广泛表达,尤其在中枢神经系统内大量存在。朊蛋白错误折叠后形成具有致病性的朊病毒(PrP^Sc),最终导致朊病毒疾病（Prion disease）,该疾病的主要病理表现是神经退行性病变。目前对朊蛋白构象改变及其致病机理皆有深入的研究和报导,但对朊蛋白的生理功能仍知之甚少。帕金森病也是一种典型的神经退行性疾病,其主要病理特征是脑内黑质-纹状体区多巴胺神经元的大量变性丢失,导致多巴胺递质水平显著降低,机体出现运动功能障碍等症状。本实验利用MPTP/MPP⁺构建帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的小鼠和细胞模型,分别通过在体和离体两个层次探索朊蛋白对多巴胺神经元是否具有保护作用,以及其和PD发病之间是否具有关联性,从而为治疗帕金森病提供新的思路和参考。实验主要分为三个部分:首先是朊蛋白敲除小鼠的验证。我们对构建的朊蛋白敲除小鼠运用PCR、WB技术,分别验证和确定朊蛋白的基因和蛋白质在KO小鼠中没有表达,并且证明敲除该基因对小鼠中脑区、纹状体区无细胞形态与数量的影响。其次是PD动物模型实验。我们分别在WT、KO小鼠中腹腔注射MPTP（30mg/kg）,连续五天每天一次,构建PD小鼠模型。小鼠行为学的结果显示,朊蛋白敲除的小鼠对MPTP毒性作用更易感。同时,IHC、WB结果显示,WT+MPTP组小鼠中脑区合成多巴胺的酪氨酸羟化酶（TH）含量,TH阳性细胞数量及密度均高于KO+MPTP组;此外,WT+MPTP组的纹状体区TH、DAT的密度也显著高于KO+MPTP组。因此,动物实验层次揭示朊蛋白对多巴胺神经元具有保护作用。最后是探讨朊蛋白对多巴胺神经元的保护作用与其可能机理。我们运用离体培养的多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞,利用RNAi技术构建朊蛋白敲低的瞬转和稳转细胞系（Tcs and Scs）,分别通过MPP⁺诱导构建两种PD细胞模型。MTT与WB实验结果显示,瞬转和稳转的朊蛋白敲低细胞系经MPP⁺诱导后,它们的细胞存活率和TH蛋白的表达量均低于用WT细胞构建的PD模型,并且Tcs+MPP⁺组细胞的线粒体损伤更加严重、Bax表达上调明显、caspase-3大量释放,从而引发下游caspase家族的级联反应,细胞死亡加剧,因此我们推测朊蛋白可能是通过Bax-Bcl-2-caspase-3这条通路,减轻了MPTP/MPP⁺对多巴胺神经元的毒性作用,从而延缓MPTP/MPP⁺诱导帕金森病的发生,这个发现对帕金森病的诊疗提供了新的参考。