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花生疮痂病(peanut scab disease)是一种常见的花生病害,该病的病原菌是花生痂囊腔菌(Elsino?arachidis(Bitanc.&Jenkins) Rossman&W.C. Allen),无性阶段为花生痂圆孢(Sphaceloma arachidis Bitanc.&Jenkins)。由于在我国发现较晚,国内关于该病原菌的相关研究报道较少。 基于此,本研究对花生疮痂病病原菌进行了系统研究,包括形态学和分子系统鉴定,生物学特性及其与其他痂囊腔菌(包括无性型痂圆孢属真菌)的系统发育关系,并建立了该病害的快速诊断体系。研究结果如下: (1)从福建省福州市和龙岩市采集花生疮痂病样品,通过切片镜检的方法进行初步鉴定,后分离纯化得到了5个纯菌株,再通过形态学和ITS序列的分子系统发育分析,最终确定我省花生疮痂病的病原菌也是花生痂囊腔菌(E. arachidis)。 (2)对E. arachidis(菌株号LY-HS-1,采自龙岩)的生物学特性进行研究,结果显示,E. arachidis适宜生长温度为23℃-27℃,葡萄糖、蔗糖和可溶性淀粉均可作为培养基的碳源,酵母膏可作为培养基的氮源,该菌在酸性条件下(pH4.5-6.5)生长较快。温度和营养物质影响菌落形态和菌丝生长速率,而酸碱度只影响菌丝的生长速率,对菌落形态没有明显影响。 (3)对E. arachidis及痂囊腔菌属其他种类,包括无性阶段痂圆孢属,进行8个基因的多基因(包括ITS,LSU,SSU,TEF,CHS,mtSSU,actin和β-tublin)序列的系统发育分析。结果表明:SSU和LSU这两个基因不能很好将痂囊腔菌属及其无性态的不同种区分开,因此在对该属及其无性阶段进行种间划分的时候,这两个基因不宜作为候选基因;ITS和TEF这两个基因可以将这些不同的种区分开来,并在一定程度上反映了痂囊腔菌属及其无性态菌物的种间亲缘关系,但这些亲缘不是特别清楚,因此在鉴定该属的种时可以选择这两个基因,但在分析该属种间亲缘关系的时候还需结合其他基因一起分析;由于其他4个基因目前在 GenBank里的序列较少,没法做系统发育分析,只对本研究中所得的序列进行了分析,其中CHS基因序列在E. arachidis和E. fawcettii种内存在一定程度的变异,可作为研究E. arachidis和E. fawcettii种内变异的候选基因,其他3个基因在不同的物种之间也存在差异,但差异较小。 (4)建立了E. arachidis的快速鉴定方法,可以在发病症状不明显或者已腐烂不能人工分离培养的样品中快速鉴定是否含有 E. arachidis,该方法灵敏度可达到0.1pg/μL。本研究中也通过该方法初步证明了病株残体的茎秆部位是 E. arachidis的越冬场所之一。 综上,本研究的结果为更深入的了解花生疮痂病的发生规律及防治和后续的深入研究提供了理论依据。